Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步的分析.pdf

Toll 样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究 中文摘要 Toll 样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡 影响的初步研究 中文摘要 目的：在心脏移植后，急性血管性排斥反应导致心肌细胞间质出血、水肿，周围 中性粒细胞浸润，血管内皮细胞死亡，最终细胞凋亡。本实验拟研究Toll 样受体通路 及其下游通路核因子-κB （NF-κB ）在心肌细胞凋亡中的作用。 方法：在体外培养C57BL6 小鼠的心肌细胞及SD 大鼠和BALB/C 小鼠的脾细胞。 在体外建立C57BL6 小鼠到BALB/C 小鼠和SD 大鼠的心脏移植细胞模型。将实验分 为六组，A 组：C57BL6 小鼠心肌细胞+PBS 液(PBS 组) ；B 组：C57BL6 小鼠心肌细 胞+TNF-α(TNF-α 组) ；C 组：C57BL6 小鼠心肌细胞+BALB/C 小鼠脾细胞(Mouse SC 组) ；D 组：C57BL6 小鼠心肌细胞+BALB/C 小鼠脾细胞+BALB/C 小鼠血清(Mouse SC+S 组) ；E 组：C57BL6 小鼠心肌细胞+SD 大鼠脾细胞(Rat SC 组) ；F 组：C57BL6 小鼠心肌细胞+SD 大鼠脾细胞+SD 大鼠血清(Rat SC+S 组) ，共培养时间为108h。运 用Annexin-V/PI 法检测各组C57BL6 小鼠心肌细胞凋亡，比较同种和异种免疫原对心 肌细胞刺激效应的差别。RT-PCR 法检测A 组、C 组、D 组、E 组、F 组心肌细胞TLR-1、 TLR-2 、TLR-3、TLR-4 、TLR-5、TLR-7、TLR-9 的表达，筛选出被激活的Toll 样受 体。利用相应的Toll 样受体的阻断抗体抑制激活的Toll 样受体，Annexin-V/PI 法检测 心肌细胞凋亡，Western-blot 法检测其下游通道NF-κB 的表达变化。 结果：运用酶消化法培养C57BL6 小鼠的心肌细胞，细胞活性好，纯度达80-90% 。 供心心肌细胞凋亡检测实验中，TNF-α 组、Rat SC 组、Rat SC+S 组的心肌细胞凋亡 比例达71.31 ±7.71%、70.05 ±5.73%、68.61 ±4.71%，与PBS 组、Mouse SC 组、Mouse SC+S 组相比，心肌细胞凋亡程度有明显差异（P0.001 ）。检测未经处理的 C57BL6 小鼠心肌细胞的各Toll 样受体信号的表达，均在相对较低水平，呈静息状态。各实验 组中，在 Rat SC 组和 Rat SC+S 组心肌细胞的 TLR-2 和 TLR-3 的表达明显增高 I 中文摘要 Toll 样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究 （P0.05 ），其中TLR-3 的增高更加明显（P0.05 ）。运用TLR-3 抗体来抑制心肌细 胞TLR-3 信号通路后，供心心肌细胞的凋亡比例减少（P0.05 ），NF-κB p65 蛋白的 表达量降低（P0.05 ）。 结论：1. 在小鼠-大鼠心脏移植细胞模型中，TLR-2 和TLR-3 是异种免疫原诱导 的心肌细胞凋亡过程中所激活的主要Toll 受体种类，而TLR-3 是受激活最明显的受 体。 2. 通过抑制TLR-3 受体信号通路的激活，可抑制下游的NF-κB 表达，减轻心肌 细胞凋亡。 关键词：异种移植；心肌细胞凋亡；TLR-3 信号通路；TLR-3 抗体；核因子-κB 作 者：郁 喆 指导老师：叶文学 副教授 II Toll 样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究 英文摘要