TGF--β与EGFP体外电转化兔骨髓间充质干细胞的实验的分析.pdf

舢舢圳Ⅲ哪Ⅲ删圳驯咖I Y2858128 目 录 目录………………………………………………………………………3 TGF—B 1和EGFP体外电转化兔骨髓间充质干细胞的实验研究(论文 标题)…………………………………………………………………4 中文摘要………………………………………………………………4 英文标题…………………………………………………………………5 ABSTRACT……………………………………………………………5 英汉缩略词对照表………………………………………………………6 前言……………………………………………………………………7日IJ舌……………………………………………………………………‘， O 1材料与方法………………………………………………………1 O 1．1实验动物…………………………………………………………1 1．2主要实验试剂及材料……………………………………………10 1．3实验方法…………………………………………………………12 1．4统计学分析………………………………………………………19 2结果…………………………………………………………………20 3讨论………………………………………………………………24 4结论…………………………………………………………………30 1 参考文献………………………………………………………………3 综述(TGF．B1修复退变椎间盘相关研究进展)……………………36 参考文献………………………………………………………………41 攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………44 致谢……………………………………………………………………45 TGF—B 1和EGFP体外电转化兔骨髓间充质 干细胞的实验研究 摘要 目的：通过电转化法介导转化生长因子B1(TGF—B1)和EGFP 基因转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)，观察II型胶原蛋白表达情况。 方法：取3只1周龄清洁级健康新西兰大白兔，麻醉后处死，无菌条 件下取出胫骨及股骨，暴露髓腔冲出骨髓，应用全骨髓细胞贴壁培养 法分离、培养出兔的BMSCs；流式细胞仪法检测细胞表型；将培养获 得的BMSCs分3组：TGF—B1+EGFP共转染组，EGFP单独转染组，空 1和EGFP对BMSCs进行转染， 白对照组。利用电转化技术将TGF—B 荧光显微镜观察转染效果，继续培养至14d…，应用免疫组化法和 western blot法分别检测II型胶原表达情况。结果：成功分离并培 养出BMSCs，经流式细胞仪鉴定其细胞表型CD90和CD44表达为阳性， CD31和CD45表达为阴性；成功转染TGF—B1至BMSCs后；通过免疫 组化检测TGF—B blot检测TGF—B1组细胞 相比较有显著差异性(PO．05)。western 0±O．006 内(0．320 2±O．007 (PO．05)。结论：电转TGF—B1质粒至兔BMSCs，能促进II型胶原 高效表达，进而可以为进一步研究奠定基础。 【关键词】：TGF—B1；骨髓间充质干细胞；电转染；II型胶原； of 1andEGFP StudyTGF—Ijl ● 』 ·● 1●J 1