酶工程第二章产酶微生物的分离和选育要点.ppt

(二)原生质体的制备 原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入细胞壁分解酶，将细胞壁分离剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的细胞，它保持原细胞的一切活性。 在放线菌和细菌中，制备原生质体主要采用溶菌酶；酵母和霉菌一般可用蜗牛酶或纤维素酶等。 影响原生质体制备的因素 1．菌体的前处理 为了使酶作用的效果好一些，可将菌作一些前处理。如细菌加入亚抑制剂量的青霉素。 2．菌体的培养时间 为了使细胞易于原生质体化，一般选择增殖期的菌体。 3 ．酶浓度 对于不同种属的微生物，不仅对酶的种类要求不同，就是对酶的浓度也有差异。另外，最佳酶浓度还随不同的生长期的菌体而变化。 4．酶处理温度 5．破壁时的pH值 6．渗透压稳定剂 等渗透压在原生质体制备中，不仅起到保护原生质体免于膨裂，而且还有助于酶和底物的结合，渗透压稳定剂多采用甘露醇，山梨醇，蔗糖等有机物和KCl和NaCl等无机物。 比较 诱变育种 原生质体 基因工程 原理 基因突变 细胞融合 基因重组 方法 辐射诱变；激光、化学物质诱变，太空（辐射、失重）诱发变异 去细胞壁→细胞融合→培养 →筛选 提取目的基因→装入载体→导入受体细胞→基因表达→筛选出符合要求的新品种 优点 能提高变异频率，加速育种过程，可大幅度改良某些性状；变异范围广。 有目的地培育优良品