大鼠远期缺血预应现象的证实及其机制研究.pdfVIP

复旦大学博士后出站工作报告 。 大鼠远期缺血预适应现象的证实及其机制研究 中文摘要 目的：研究NF．gB及其调控的炎症因子在肾脏远期缺血预适 应中的作用，结合血肌酐水平、肾组织病理学变化、肾小管 损伤积分，从组织到分子水平初步探讨远期缺血预适应对于 急性缺血性肾损伤是否具有保护作用及其可能的作用机制， 为进一步研究远期缺血预适应的保护作用机制以及临床防治 急性肾衰竭提供理论依据。 材料和方法：采用双侧肾蒂完全夹闭法制备大鼠肾脏远期缺 血预适应模型。大鼠随机分成5组，每组6只；1．假手术组(sham 组)；2．单纯缺血再灌注6小时组(I／R6h)；3．单纯缺血再灌注 组大鼠只暴露双侧肾蒂，空置20分钟后关闭腹腔；4、5组大 鼠双侧肾蒂充分暴露后用动脉夹完全夹闭，20分钟后松开， 关闭腹腔。8天后，各组大鼠分别再次开腹，充分暴露双侧肾 蒂，除Sham组外均用动脉夹完全夹闭肾蒂，40分钟后松开 大鼠处死，所有大鼠处死前均采血和取肾组织。检测血肌酐、 评价肾组织病理学变化。用免疫组织化学方法检测ICAM．1； TNF．a、MIP．2mRNA表达；用Western Blotting方法检测肾 B 织NF．KDNA结合活性及P50、P65二聚体亚单位组成。 I／R6h相比并无明显差异，提示远期缺血预适应对急性缺血再 组与IPC．I／R组均存在不同程度的肾脏损伤，但与I／R组比较， 肾小管上皮细胞脱落、刷状缘消失、’肾小管阻塞和问质水肿。 复旦大学博士后出站工作报告 ③经免疫组化发现，I／R24h组ICAM。1肾脏表达显著强于 组的NF．K IPC—I／R24h)(P0．05)组(PO．05)。 结论：①成功地建立较为稳定的远期缺血预适应大鼠模型； ②肾脏远期缺血预适应使急性缺血后大鼠血肌酐上升幅度明 显减少，组织学损伤明显减轻，小管损伤积分显著减少，组 织间粘附分子ICAM．1浸润明显减轻。提示远期缺血预适应对 肾功能有一定的保护作用；③肾脏远期缺血预适应在mRNA 症因子的表达有明显的抑制作用，在蛋白水平对COX．2、 MCP．1有显著抑制作用。远期缺血预适应对肾脏的保护作用 可能与诸多炎症因子的表达受到的抑制有关。④NF．KB在远 期缺血预适应中起关键作用。IPC．I／R6h活化的NF．KB显著 B 强于IPC．I／R24h，这可能与早期活化的NF．KP50／P50同二 聚体亚单位对随后24h的NF．KB的活化抑制有关。受抑制的 NF．1c B通过基因调控，降低受控炎症因子的mRNA及蛋白质 表达，从而减轻急性缺血对肾脏的损害。 关键词：肾脏远期缺血预适应核因子．KB细胞间粘附分子 ．1血管细胞粘附分子．1内皮素．1巨噬细胞炎症蛋白．2肿 瘤坏死因子．Q单核细胞趋化蛋白．1环氧合酶．2实时定量 逆转录．聚合酶链反应免疫印迹法凝胶电泳迟滞分析 复旦大学博士后出站工作报告 Renal Ischemic AttenuateAcute PrecOnditioning IschemicinRat anditsMechanism Injury Kidney Abstract ectiveInthis establishedaratmodelofrenal Obj study．we ischemic toobservethe ofrenal pfecond“ioning changes conte