工程菌发酵产酶和其在1_3_丙二醇耦合酶催化制备中的应用.pdfVIP

化 工 进 展 2010 年第29 卷第11 期 CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS ·2143 · 研究开发 工程菌发酵产酶及其在 1, 3-丙二醇耦合酶催化制备中的应用 1 1 1 1 1，2 彭益强 ，庄 园 ，林志强 ，黄文爱 ，方柏山 1 （华侨大学厦门校区省工业生物技术实验室，福建 厦门 361021 ； 2 厦门大学化学化工学院，福建 厦门 361005 ） 摘 要：培养定向进化后的质粒保藏菌E. coli BL21 （DE3 ）pLysS /PET-15b-dhaT’-24 并进行质粒抽提，将抽提 的质粒转化入感受态宿主细胞E. coli BL21 （DE3 ）pLysS 中得产1,3-丙二醇氧化还原酶的工程菌。工程菌经乳糖 诱导后进行发酵培养获得酶活为 182 U/mL 的1,3-丙二醇氧化还原酶，最适反应pH 值为 10，pH 值稳定范围为 7.0～9.0 ，最适反应温度为55 ℃，温度稳定范围为30～45 ℃。利用工程菌产的1,3-丙二醇氧化还原酶进行转化 3-羟基丙醛为 1,3-丙二醇的反应，同时偶联甘油脱氢酶（由另一工程菌制备）转化甘油的反应进行辅酶 NADH 的再生，实现了 1,3-丙二醇的双酶耦合的连续反应。由于来源于工程菌的双酶酶学性质相适应，反应连续进行 34 h 后，底物3-羟基丙醛的转化率达63.4% ，产物1,3-丙二醇的产率达64.6%。 关键词：1,3-丙二醇氧化还原酶；工程菌；辅酶再生；1,3-丙二醇 中图分类号：TQ 923 文献标志码：A 文章编号：1000 –6613 （2010 ）11 –2143 –06 Enzyme from engineering strain and application in 1, 3-propanediol coupling-enzymatic catalysis 1 1 1 1 1，2 PENG Yiqiang ，ZHUANG Yuan ，LIN Zhiqiang ，HUANG Wenai ，FANG Baishang 1 （Provincial Key Laboratory of Industrial Biotechnology ，Hua Qiao University ，Xiamen 361021 ，Fujian ，China ； 2College of Chemistry and Chemical Engineering，Xiamen University ，Xiamen 361005 ，Fujian ，China ） Abstract ：Engineering strain was acquired by transforming directly evolved plasmid from the incubated conservation bacterium E. coli BL21 （DE3 ）pLysS/PET-15b-dhaT’-24 to the host cell E. coli BL21 （DE3 ）pLysS. The lactose induced engineering strain was fermented to