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γ射线照射对丝素蛋白生物相容性及降解性的影响 中文摘要 中文摘要 【目的】 为研究γ射线对丝素蛋白的生物相容性及降解性的影响，本研究通过对γ射 线照射后丝素蛋白力学性能的测试，筛选出能进行生物学评价的照射剂量，并利 用细胞及动物实验的方法对照射后丝素蛋白的生物相容性及降解性进行研究。 【方法】 1. γ射线照射后丝素蛋白膜的力学结构变化情况：将制作好的丝素蛋白膜，加 入分别为0、25 、50、100、200 、300 、500、1000kGy 的γ射线照射组。（1）丝素 蛋白膜断裂强度和断裂伸长率变化：将丝素蛋白膜用特制的模具，制成哑铃状条 带，对各组丝素蛋白膜的断裂强度和断裂伸长率进行测试。（2 ）丝素蛋白膜结构 变化的测试：将照射后的丝素蛋白膜剪碎制成粉末，用KBr 压片，经Nicolet 5700 FTIR 型傅立叶变换红外光谱仪检测。2. γ射线照射后的丝素蛋白生物相容性研 究：将SD 大鼠乳鼠颈椎脱臼处死后，取其背部皮肤，分离原代真皮细胞培养传至 3、4 代。（1）真皮细胞在丝素蛋白膜上的生长曲线测定：将原代培养的真皮细胞 5 以每孔1×10 细胞，接种于铺在24 孔板中的辐照丝素蛋白膜上，培养7 d，每天 各取6 孔，使用CCK-8 法检测细胞增殖活力，酶标仪于450 nm 波长处，测得OD 值，并计算细胞量，求得生长曲线。（2 ）丝素蛋白浸提液细胞毒性试验：用制备 好的丝素蛋白浸提液培养原代真皮细胞，以每孔5000 个，接种于3 块96 孔板中， 待细胞贴壁后移去普通培养基，加入丝素蛋白膜浸提液，100 μL/孔，培养 1、3 和6 d，每个时间点各取一板，加入CCK-8 溶液反应，使用酶标仪测得各孔OD 值。 （3 ）溶血试验：取志愿者全血制成稀释血。设生理盐水、双蒸水、丝素蛋白浸提 液及含丝素蛋白膜的生理盐水4 个组。每个试管加入0.2 mL 稀释血，37℃水浴60 min 。反应后的溶液以1000 r/min 离心5 min，取上清液移入96 孔板中，使用酶标 仪于545 nm 波长处测定吸光度。3. 生物相容性及降解作用的体内研究：将不同剂 量（25kGy、50kGy、100kGy、200kGy ）γ射线照射后的丝素蛋白膜植入SD 大鼠 皮下，植入后 7、14、28 、56、84 天，剖杀取材。对植入部位的皮下组织进行病 I 中文摘要 γ射线照射对丝素蛋白生物相容性及降解性的影响 理检查，通过ELISA 法检测丝素蛋白植入后的大鼠血清中IL-6 和TNF- α含量； 取出植入后的丝素蛋白称重，计算质量减少率并绘制质量减少曲线。 【结果】 1. γ射线照射后丝素蛋白膜的力学结构变化情况：经过0、25 、50、100、200 、 300、500、1000kGy 的γ射线照射后，丝素蛋白的断裂强度及断裂伸长率随照射剂 量的增加，均呈现出下降趋势。红外光谱仪检测发现，γ射线照射后的丝素蛋白 -1 -1 Silk II 的吸收峰1628 cm 、1526 cm 并未发生明显移动，说明γ射线对丝素蛋白 的二级结构影响不明显。2. γ射线照射后的丝素蛋白生物相容性研究：原代真皮 细胞在丝素蛋白膜上的生长情况良好，增殖表现出相同的趋势，均在生长 96h 达 到峰值，而后下降，对每个时间点各组细胞增殖活力进行单因素方差分析，各组 吸光度值均具有方差齐性，且各组细胞增殖活力之间不存在显著性差异(p 0.05) 。 （2 ）细胞用丝素蛋白浸提液培养24 、72 和144 h，分别测定增殖情况，并按照国 家标准，其毒性在分级标准的1 级（RGR:75% －99% ）以内，经SPSS17.0 统计分 析，各时间点各组细胞RGR 差异无统计学意义（p 0.05 ）。细胞增殖趋势也具有 一致性。（3 ）丝素蛋白浸提液及含丝素蛋白的生