乙体氯氰菊酯对鼠脑组织谷氨酸-谷氨酰胺环路的干扰及其机制探讨.pdfVIP

一、摘要 中文论文摘要…………………………………………………………………1 英文论文摘要………………………………………………………………5 二、英文缩略语………………………………………………………………………8 三、论文 前言………………………………………·“……………………………………9丑U舌…………”…………………………”“……………………………………譬 材料和方法………………………………………………………………10 实验结果…………………………………………………………………………17 讨论……………………………………·………………………………………··20 B O…22 结论…………·………………………………………·………………··0ta 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………23 五、参考文献…………………………………………………………………………24 六、附录 综述……………………………………………………………………………26 致谢……………………………………………………………………………35 个人简介………………………………………………………………………36 胺环路的 刖 茜 拟除虫菊酯(pyrethroid，PD)是根据天然除虫菊素的结构人工合成的农药， 因具有广谱、高效、低毒、低残留等特点而被广泛应用。大量研究表明，该类药 物属于神经毒物，中毒时主要表现为中枢神经系统的强烈兴奋症状。 以往对PD神经毒性研究主要集中在膜电压依赖性离子通道、信号传导及中 枢神经递质等多个靶位点上。研究发现，PD可致脑内兴奋性神经递质谷氨酸 引发一系列生化级联反应，最终导致细胞凋亡。而PD如何致突触间隙Glu增多 至今尚未阐明。 Glu是中枢神经系统中兴奋性突触传递的主要神经递质。星形胶质细胞和神经 谢的主要途径，谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase，GS)和谷氨酰胺酶则是此 环路中合成和水解Glu的关键酶。释放致突触间隙的Glu主要通过谷氨酸转运体．1 (glutamate 因此，Glu．Gin环路在PD致Glu递质传递紊乱的兴奋性神经毒性中起着至关重要的 作用。此外，星形胶质细胞数量约为神经元的10倍，并且介于神经元和毛细血管 之间，是血脑屏障的重要组成部分，血液中的PD或代谢产物只有通过星形胶质细 胞才能作用于神经元。因此，PD致突触间隙Glu增多可能与清除功能下降有关， 键环节。研究发现，溴氰菊酯染毒大鼠海马和皮质突触体GLT-1对Glu的摄取功能 降低，但作用机制尚不清楚，有关PD对Glu-Gln环路干扰的详细研究也未见报道。 为广泛的II型PD类农药。因此，本研究通过p．CP对大鼠脑组织Glu．Gln环路干扰的 毒防治提供科学依 材料与方法 一、动物分组及染毒 健康成年Wistar大鼠按体重随机分为4组，每组10只，雌雄各半。以一次经 重。以食用色拉油稀释受试物质，对照组给予等量色拉油。实验期间自由摄食及 饮水，4h后乙醚麻醉处死大鼠，分离大鼠脑组织供试。 二、观察指标及检测方法 (一)症状观察 染毒后连续观察并记录大鼠中毒状况出现的时间、中毒表现及死亡情况。 (二)Glu及Gin水平 应用分光光度法按试剂盒说明进行测定。 (三)GS活性及GLT-1的蛋白表达 1、GS活性 用预冷生理盐水将脑组织制成1％匀浆液，超声处理后参照文献测定脑组织 GS活性。考马斯亮蓝法测定蛋白含量。GS活性检测结果以每分钟每毫克组织蛋 白催化生成的丫．谷氨酰异羟肟酸的nmol数表示。 2、GLT-1的蛋白表达 利用RIPA蛋白裂解液提取脑组织总蛋白，紫外分光光度计测定所提蛋白溶 液浓度。经聚丙烯酰胺凝胶电泳，转印，封闭，TBS．T洗膜，一抗4℃过夜，TBS．T 洗膜，二抗孵育2h，TBS．T洗膜，ECL法显色成像。利用