中药新药健胎液毒理学安全性评价研究.pdf

1川I“批^、毒睁j丹新j筒 中药新药健胎液的毒理学安全性评价研究 硕士研究生：程建安 导师： 陈国元教授 中文摘要 健胎液(PRKRQA)系同济医学院中西医结合研究所研制的新药，是经传统 长期临床医学检验可运用于防止胎儿宫内生长迟缓的验方，由黄芪、川芎、当归、 丹参、桑寄生等益气活血、补肾安胎类中药组成的复方口服液。急性毒性资料显 示健胎液毒性低，没有测出其LD。，小鼠灌胃最大耐受量为1209／kg。为今后安全 地应用于临床及做好投入前生产的准备，本次实验按新药开发程序进一步对其长 期毒性、遗传毒性、生殖毒性三个方面的毒理学安全性做了系统的评价研究。 1．长期毒性 观察连续12周灌服健胎液对大鼠所产生的毒性反应、出现损害的靶组织或器 官和其可逆性、剂量一效应关系，了解大鼠对健胎液能耐受的剂量范围和对人的无 毒安全剂量，为临床安全性提供参考。选用80只清洁级大鼠随机分为四组(每组 20只，雌雄各半)，设高中低三个健胎液剂量组一个蒸馏水对照组，每日灌胃两 次。每组动物于12周停药后各取10只作一般项目、血液学、血液生化、尿液、 大体解剖及病理组织学检查，剩余5只继续观察2周，了解毒性反应的可逆性和 迟缓毒性。结果表明一般检查未见异常：各剂量组与对照组比较体重增长差异无 显著性；给药各缀血常规、血液生化、尿常规各指标与对照组无显著性差异；各 组大鼠脏器外观正常，未见明显肉眼病变，组织切片均未见任何中毒性病理改变。 故认为其临床药效学成人推荐剂量0．759／kg是安全的。 2．遗传毒性 药物遗传毒理试验是新药安全性评价的重要组成部分，本研究选用了其体外 试验中的鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)和体内试验中的啮齿类动物微 核试验(小鼠微核试验)。①鼠伤寒沙门菌回复突变试验是国内步}常用的筛选致 突变物的一种快速、经济的遗传毒理学体外试验，在致突变试验中已一致通过作 为体外首选的标准实验。选用已知致突变物二氨基芴(2一AF)、1，8-二羟基蒽醌、 敌克松(Dexon)、叠氮化钠作阳性对照，无菌蒸馏水为阴性对照，受试物分设5000、 500、50、5、0．5扯g／．n五个不同浓度。采用标准平板法，不同处理各设三皿平行， 试验重复一次。受试物所诱发的回变菌落数(i±s)增加，超过对照的2倍，有剂量 一反应关系；或某测试点超过对照的2倍以上，呈现可重复性并有统计学意义即可 判定为阳性。健胎液对实验用四株菌株所诱发的回变菌落数均未超过对照的2倍。 因此，在本试验条件下，健胎液的Ames试验结果为阴性。②小鼠微核试验是利用 小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)中含微核的比率来判断受试物是否具有诱发遗传毒 性作用。取健康昆明种小白鼠72只，按体重随机分为6组，每组12只，雌雄各 照组。空腹间隔24小时连续灌胃2次，于第2次灌胃后6小时颈椎脱臼处死，按 经典微核试验方法取胸骨制成骨髓涂片，Gimsa染色，每只小鼠计数嗜多染红细胞 1000个。结果表明，与对照组比较，雌、雄小鼠微核发生率无显著性差异(乃O．05)； 而阳性对照组则明显高于阴性对照组，其差别有极显著性意义(PO．01)。 3．生殖毒性 新药审批办法规定凡同妊娠有关的中药新药均需进行有关的生殖毒性试验。 本研究选用了反映雄性生殖细胞受损的小鼠精子畸形试验和大鼠致畸试验。①小 鼠精子畸形试验：正常情况下哺乳动物的精液中也存在少量的畸形精子，但在可 引起生殖细胞遗传性损伤的化学毒物作用下，睾丸产生的畸形精子数量可大量增 加。因此用检查雄性动物接触化学物精子畸形率的高低，来反映该化学物的生殖 毒性和对生殖细胞的潜在致突变性。试验结果表明健胎液本身不能诱发小鼠精子 畸形，各剂量组间亦无显著性差异，环磷酰胺阳性对照组精子畸形率显著增加 (尺0．01)。②大鼠致畸试验是通过在器官形成期对妊娠动物给药，妊娠末期观察 胎仔有无发育障碍与畸形来评价受试物致畸作用。取符合要求的健康性成熟 Wistar雌性大鼠i00只与雄性大鼠合笼交配，查到雌鼠阴栓或阴道涂片检出精子 健胎液剂量组和阴、阳性对照组。每组受孕鼠为12～15只。孕鼠在妊娠第6～15 天灌胃给药，连续lO天分别给予不同剂量的健胎液、VitA及蒸馏水：孕鼠于孕期 每三天称体重一次，随体重变化调整受试物剂量。孕鼠于孕期第20天断头处死， 检查各指标。结果表明健胎液对孕鼠妊娠期体重、净增重及各剂量组各