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壬基酚对雄性SD 大鼠生殖系统功能的影响 中文摘要 中文摘要 目的：壬基酚（nonylphenol ，NP ）是一种广泛使用的化工原料，主要用于合 成洗涤剂、造纸、纺织印染、皮革化工、乳液聚合、农药等工业领域。随着经济 的飞速发展，我国每年都有大量的壬基酚通过工业 “三废”及生活污水进入环境 介质。壬基酚具有拟雌激素活性，是典型的环境内分泌干扰物。环境中极低浓度 的壬基酚即可通过生物蓄积效应和食物链传递，潜在危害生物体的内分泌、生殖、 免疫、神经等多个系统机能。目前，关于雄性动物成年期壬基酚染毒对生殖器官、 性激素水平及精子受精功能影响的研究较少，特别是精子顶体相关指标、附睾抗 氧化状态及凋亡等方面的研究尚未见报道。本课题通过对成年雄性SD 大鼠灌胃染 毒，研究壬基酚对大鼠睾丸、附睾和精子的损伤作用，探讨其对雄性大鼠生殖功 能的影响及其可能的毒作用机制。 方法：32 只健康成年SPF 级雄性SD 大鼠，经适应性饲养 1 周后，按体重随 机分为 4 组：溶剂对照组（玉米油）和低（40mg/kg ）、中（100mg/kg）、高剂量 （250mg/kg ）壬基酚染毒组，每组8 只。从大鼠12 周龄开始，采取灌胃方式染毒， 容量1.5ml/kg，隔天上午染毒1 次，连续90d 。（1）一般状况及体重：每日观察动 物的饮食和活动情况，注意大鼠被毛、皮肤、眼睛、呼吸以及日常行为方面的变 化。隔天称重一次；（2 ）大鼠处死后，分离双侧睾丸、附睾和附睾尾，称重，并 计算相应的脏器系数；（3 ）苏木素-伊红（HE ）染色，观察大鼠睾丸组织病理学改 变；（4 ）腹主动脉采血，分离血清，酶联免疫吸附法（ELISA ）检测血清睾酮水平； （5 ）制备附睾尾精子悬液，利用光学显微镜及活细胞工作站，计数精子浓度、畸 形率和活动度；（6 ）通过使用相应荧光探针和流式细胞技术检测精子存活率、顶 体完整性、线粒体膜电位（MMP ）和游离钙离子（[Ca2+] ）水平；（7 ）采用改良 i Kenndy 法检测精子顶体酶活性；（8 ）通过流式细胞仪和荧光染料（H DCFDA ）检 2 测附睾尾精子活性氧（ROS ）水平；（9 ）利用酶联免疫吸附法检测附睾组织抗氧 化物酶（（超氧化物歧化酶，SOD）和（过氧化氢酶，CAT ））活性；（10）使用TUNEL 法评估壬基酚对附睾凋亡诱导效应。 结果：（1）染毒后，各剂量壬基酚染毒组大鼠均出现精神萎靡、稀便、被毛 I 中文摘要 壬基酚对雄性SD 大鼠生殖系统功能的影响 不舒展、毛发灰暗甚至脱毛现象，组间差异不明显。高剂量组大鼠在灌胃时反抗 较强烈，攻击性行为在染毒后期明显增强。各染毒组大鼠体重与溶剂对照组比较， 差异均无统计学意义。 （2 ）与溶剂对照组比较，仅低、高壬基酚染毒组大鼠的附 睾重量显著下降。各染毒组大鼠睾丸、附睾和附睾尾的脏器系数与溶剂对照组比 较，差异均无统计学意义。 （3 ）病理学检查发现，溶剂对照组大鼠睾丸曲细精管 排列紧密、结构完整，生精上皮基膜完整，各级生精细胞层排列规则、层次清楚； 低剂量壬基酚染毒组曲细精管结构相对规则、大小一致，管间隙略有增大，生精 细胞层基本完整；中、高剂量壬基酚染毒组睾丸出现部分曲细精管萎缩、管间隙 增大，生精细胞层变薄、结构排列紊乱，管腔内精子细胞数量减少，部分管腔可 见脱落的上皮细胞碎片。 （4 ）与溶剂对照组比较，低剂量壬基酚染毒组大鼠血清 睾酮水平略有升高，中、高剂量组睾酮水平有所降低，但仅高剂量组睾酮水平降 低明显，差异有统计学意义。（5 ）附睾尾精子计数、活动度随着染毒剂量的增加 而逐渐降低，而精子畸形率随着染毒剂量的增加而逐渐升高。与溶剂对照组比较， 中、高剂量壬基酚染毒组大鼠附睾尾精子数量显著减少、活动度显著降低、畸形 率显著增加。（6 ）流式细胞仪检测结果显示，与溶剂对照组比较，中、高剂量壬 基酚染毒组精子的（PI-/PNA+ ）% 明显升高；高剂量壬基酚染毒组大鼠精子hMMP