烟草磷酸吡哆醛解酶的分离纯化与表征.pdfVIP

摘要 涉及氨基酸的代谓十反应，在合成和代谢的反应中发挥重要的作用。在不同VB6化合 物间的相互转变的途径中，磷酸酶发挥重要的作用，可以使磷酸酯形式的VB6去磷 酸化生成游离形式的VB6。 烟草是一种经济作物，在国民经济发展中起着重要的作用。同时，烟草作为一 种模式植物，广泛用于植物生理生化的研究。磷酸吡哆醛水解酶(PLP水解酶)在烟 草体内vB6的转换代谢中起着重要作用。 Fast G．100 本实验采用硫酸铵沉淀、DEAE．SepharoseFlow阴离子交换、Sephadex 凝胶过滤和SPSeDhadexC．25阳离子交换柱层析等步骤，对烟草PLP水解酶进行了分 离纯化。结果显示：该酶被纯化了119．6倍，比活力为1110．09 U／mg，得率为28．49％， kDa，亚基分子量约为25kDa。 经凝胶过滤和SDS．PAGE测得该酶的全分子量为49．6 对PLP水解酶的部分酶学性质研究，得出该酶的最适温度为50℃，最适反应pH为 5．5。但在50℃条件下该酶很不稳定，在短时间内活性损失较大，而在30℃~40℃条件 下，该酶能保持较好的活性稳定。 除。产物f磷酸三钠和PL)对酶活性具有很强的抑制性，底物竞争性抑制剂ATP和对硝 基苯磷酸二钠(pNPP)也具有较强的抑制作用。 更好的亲和力。 关键词：烟草；磷酸吡哆醛；水解酶；纯化；性质 Abstract Vitamin is a of B6 water-solubIe group vitamin， thefree incIuding fomsof Pyridoxine(PN)， Py“doxamine(PM)? andthe Pyridoxal(PL) forInsof phosphate Pyridoxine-5‘。phosphate(PNP)， Pyridoxamine．5、．phosphate(PMP)? Pyridoxal．5‘．ph． actsasthe essential in osphate(PLP)．Pyridoxal一5‘-phosphate coenzymemanymetab01ic transltlonofamino acidsand an role ina playsimportant varie吟ofsyntheticand metaboJ】c reactlons·Inthe mutual transfonnation between of compoundsVB