环境溶藻细菌的测与评价.pdfVIP

中文摘要 环境溶藻细菌的检测与评价 研究生赵传鹏 指导老师浦跃朴教授 东南大学公共卫生学院 中文摘要 我国盲营养化湖泊的比例达到60％．太湖、滇池等重要水源水体在复秋季=竹频繁爆发蓝 藻水华，严重影响了当地人民生活乖J—L农、JE发展。在各种理化手段治理效果不甚理想的情况 下，微生物除藻技术已经越来越受到研究者的关注。溶藻细菌在此技术中起着重要的作州。 本课题旨在建立分子生物学方法分析、检测环境溶藻细菌，并对太湖土著溶藻细菌进行分离 与除藻效果的初步评价，为微生物除藻技术的构建和应用提供科学依据。 本文分四个部分进行阐述： 1．环境溶藻细菌PcR定性检测法的建立 假单胞菌属是较为常见的环境溶藻细菌。本研究根据假单胞菌属16srRNA基闻序列设 计特异性引物，应用PcR技术打增目标细菌。针对PcR反应条件中的Mg”、dNTP、引物、 Taq酶，应用止交试验设计确定了假单胞菌属特异性引物PcR扩增的最佳反应体系：反应 70～100n 总体积为20LLL，含DNA 1．0mM、Taq g、dNTP300“M一匕F游引物各10pm、Mgcl2 Bu髓r2 酶1．5个单位、lO×Reaction5此。热循环条件为：95℃，5min：30个循环．92℃， 能够快速检测出环境样本中的目标菌属，最低检测限为3On2DNA。 2．环境洛藻细菌RTQ．PcR定量检测法的建立 Green 本研究应用sYBR I标记技术，与上章的最佳PcR条什相结合，建立了实时荧光 定量检测假单胞菌届在环境中的相对丰度的RTQ．PCR方法。该方法对总细菌的检测范同为 (R2=O．994)。总细菌与假单胞街属初始拷贝数与ct值之间的线性关系曲线表达式分别为：ct number卜46 number+226789。应阳 (usu)=‘3，908lLgcopy 0741，Ct(PsE)=-3．265LgCopy 东南大学硕=b学位论_义 该方法定量检测太湖水样及南京市污水处理厂活性污泥等环境样本中假单胞苗属的丰度，证 明此方法在检测环境样本中假单胞菌属丰度的可行性。 3．溶藻细菌PcR检测法在太湖水除藻研究中的应用 应j=}；|以上建立的常规PcR技术以及RTO—PcR技术，分别对悬=|丰丁太湖梅粱湾水域的除 藻中试装置中三种人一F介质富集的总细菌基因组DNA进行定性、定量分析。常规PcR技术 对8月份二种介质定性分析发现，捌利上寓集人量的假单胞凶属i实时荧光定量PcR对5一lO 月问三种介质定量分析发现，j种介质上目标细菌丰度分别为组合填料：O84％、无纺布填 料：O58％、弹性填料：O35％，其对假单胞茁的富集能力由强至弱为组台填料无纺布填料 ，弹性填料。在o=O 05的水平上各个装置叶1间纵面的细甜丰度高丁进水及出水纵面，斤两 者在统计学上无明显的差异。每个纵面上．表面采样点及底部采样点上细菌的丰度低于中部 采样点。 4．溶藻细菌的分离及其评价 从太湖蓝藻水华爆发时分离获得了铜绿微囊藻，并经高效液相色谱对其产毒量进行分 析。结果表明，当藻细胞起始浓度为7．8×10。个／mL，采样问隔为8小刚，四个时间点每106 个藻细胞的Mc—LR产毒索量分别为0．3523¨卧O 3047“卧O．2815pg、O．227l¨g。于梅梁湾 水域放置的除藻中试装置的人一r介质上分离山一株溶藻细菌，经形态学、生理与生化特性． 以及16srRNA特异性引物扩增综合分析，初步鉴定该株苗属丁假单胞菌属：该茁对源自太 湖的铜绿微囊藻具有较强的溶藻作用。其最低溶藻浓度为105个／mL。在太湖水、PBs以及 BGll培养基等不同反应体系内，当藻细胞初始浓度为7．8×106