维生素A缺乏对、小鼠胚胎发育的影响及其基因水平作用机制的探讨.pdfVIP

同济医科大学 硕士论文 ‘维生素A缺乏对小鼠胚胎HoxC4(3．5) HoxDl0(4．5)基因表达的影响 研究生：樊建设 指导教师：朱清华 摘 要 本文通过观察维生素A缺乏对小鼠胚胎HoxC4(3，5)和 Hox基因表达的关系，从基因水平探讨维生素A缺乏影响了 胚胎生长发育的作用机制 (动物采用初断乳的清洁级昆明小鼠，常规适应性饲养一 周，然后将雌鼠按体重分层随机分为2组(A组和B组)。A 组为正常对照组(VitA4000 IU／kg饲料)，B组为维生素A缺 0 乏组(VitA lU／kg饲料)。在饲养的第16周，B组出现维生 素A缺乏症状。在饲养的第17周按雌：雄-2：l合笼交配。 在怀孕的第12天和第14天，分别对孕鼠摘眼球留取血标本。 然后，颈椎脱臼处死，立刻剖腹取出胎鼠，所用器具必须高 温处理或者用焦碳酸二乙酯(DEPC)水处理，确保无RNA 酶。其中，A组(正常对照组)中取孕12天和孕14天的母 鼠各6只；B组(维生素A缺乏组)中取孕12天和孕14天 的母鼠各6只。分别从每只孕鼠随机取出2只胎鼠，迅速置 于液氮中速冻，然后置予．700c冰箱保存待测。 采用常规荧光法测定孕鼠血清Ⅵ坂。 同济医科大学 硕士论文 基因mRNA含量。 外显子区，设计两对引物。取正常对照组的孕14天母鼠2只， OneTubeRT— 随机抽取鼠胎若干只提取总RNA。利用TitanTM PCR 片段作为DNA探针，按照地高辛DNA标记及检测试剂盒 Mannheim公司产品)的方法，分别对制备的两 (Boehringer 个片段进行标记。将鼠胎从．700C取出后置于一20。C，在恒冷切 u 片机上将鼠胎沿旁矢状切面切成6-8m厚的切片，用地高辛 标记的探针与鼠胎切片进行原位杂交，探查mRNA,并用酶联 免疫显色。采用MPIAS多嫫体彩色图象分析系统，对杂交点 的阳性率进行半定量分析。 实验结果：喂以维生素A缺乏饲料的B组小鼠在喂养的 第16周时，出现明显的维生素A缺乏的症状，且血清维生素 A水平明显低于正常对照组(A组)(P0．01)。维生素A缺乏 明显低于正常对照组(A组)(PO．01)。本实验结果显示：当 5 母鼠处在严重维生素A缺乏状态时怀孕，其仔代胚胎中Hox3 和Hox4．5基因的表达量明显减少．这说明维生素A影响了 5 Hox3．5和Hox4．5基因的表达。维生素A缺乏导致了Hox3 和Hox4．5基因表达量的减少，从而发挥其影响胚胎的生长发 育和致畸作用。户—，～～’ 关键词： 维生素A缺乏Hox基因 基因表达 小鼠胚胎 同济医利大学 顺士论文 The effectsofVitaminA and deficiencyOil。Hox3．5 Hox 4．5 in mouse genesexpressionembryos