肌醇六磷酸的几次级磷酸化形式对HT-29细胞体外生长的抑制作用.pdfVIP

肌醇六磷酸的几种次级磷酸化形式对HT-29 细胞体外生长的 抑制作用 摘要 目的：比较肌醇六磷酸（IP ）的不同次级磷酸化形式对人结肠癌HT-29 细胞体外生 6 长的影响，并初步探究其作用的相关机制。 方法： 1．应用MTT 实验检测不同浓度IP 、IP 、IP 作用48h 后，对结肠癌HT-29 3 1 6 细胞生长的抑制率，并分别计算半数抑制浓度（the half maximal inhibitory concentration，IC50 ）； 2．流式细胞术法检测不同浓度IP3 和IP6 对结肠癌HT-29 细胞凋亡的发生率和细胞 周期的影响； 3．免疫细胞化学法检测不同浓度IP3 和IP6 对HT-29 细胞内PCNA 、Bcl-2 、Bax 表 达的影响； 4．实时定量PCR （Real –time PCR,RT-PCR ）检测不同浓度IP3 和IP6 对细胞癌基因 P53 、Bcl-2 、Bax mRNA 表达的影响； 5．Western blot 检测 IP3 和IP6 作用HT-29 细胞后，癌基因P53 表达的变化。 结果：1.IP 、IP 、IP 均具有抑制HT-29 细胞增殖的作用，且IP 、IP 的作用效果 3 1 6 3 1 均优于IP （P0.05 ），尤以IP 的抑制作用最强（P0.05 ）。IP 、IP 、IP 作用48h 6 3 3 1 6 对HT-29 细胞的IC50 值分别为2.3mmol/L、3.3mmol/L、3.5mmol/L 。 2．IP3 和IP6 均可使HT-29 细胞细胞周期发生G1 期阻滞，且随着IP3 和IP6 干预剂 量的增加，HT-29 细胞停留在 G1 期的细胞增加，同空白对照组相比，差别具有显 著性（P0.05 ），其中以IP3 的阻滞作用更强。与对照组相比， IP3 和IP6 各剂量组 HT-29 细胞凋亡率均有升高，并且随着IP3 和IP6 干预剂量增加，细胞凋亡率逐渐升 高，与IP6 相比，IP3 作用组细胞凋亡率更高（P0.05 ）。 3．与对照组相比，不同浓度的IP3 和IP6 对PCNA 的表达均有明显抑制作用，可抑 制Bcl-2 蛋白的表达，并促进Bax 蛋白的表达（P0.05 ）。且在相同剂量下，IP3 的 作用较IP6 更为明显（P0.05 ）。 4．随着IP3 和IP6 作用剂量的增加，HT-29 细胞P53 、Bcl-2 mRNA 的表达均降低， Bax mRNA 的表达增加，差别具有显著性（P0.05 ）。且在相同剂量下，IP3 的作用 效果优于IP 。 6 5．与对照组相比，IP3 和IP6 组HT-29 细胞P53 蛋白表达均降低，差别具有显著性 （P0.05 ）。其中以IP3 组下调P53 蛋白的作用更明显（P0.05 ）。 结论： IP6 的次级磷酸化形式均可有效的抑制结肠癌HT-29 细胞的生长，且抑制作 万方数据 用效果均优于IP ，其中尤以IP 的作用最明显。IP 可显著的抑制HT-29 细胞PCNA 、 6 3 3 P53 、Bcl-2 基因的表达，并促进Bax 基因的表达，从而起到抑制癌细胞增殖，诱导 凋亡的作用，其作用效果显著优于IP 。