蜂胶乙醇提取物导人喉癌Hep-2细胞凋亡及其对p56、Bcl-2表达影响的研究.pdfVIP

中文摘要 蜂胶乙醇提取物诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡 及其对p53、Bcl一2表达影响的研究 摘 要 目的：蜂胶是蜜蜂从植物的幼芽及树干上采集的树脂，并混入其上 颚腺分泌物、蜂腊和少量花粉加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体 物。据报道世界各地在蜂胶中共鉴定出300多种成分，其中很多单成分具 有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤以及提高免疫功能的作用。在民间用于治疗各 种疾病，如，心血管疾病、血液系统疾病、牙齿疾病，皮肤病和癌症，提高 免疫力，治疗消化道溃疡、保护肝脏等。研究表明蜂胶对体外培养的多种 癌细胞有杀伤作用，对小鼠移植的肝肿瘤、S180肉瘤、腹水瘤细胞等体 内肿瘤有抑制作用。蜂胶又是一种天然的免疫强化剂，对肿瘤细胞有选择 性的杀伤效应，而对正常细胞无影响或伤害很小。 此项研究的目的是为了探讨蜂胶体外诱导人喉癌Hep．2细胞凋亡及 对p53、Bcl-2表达的影响。 方法： 的影响 当细胞在对数生长期，加入不同浓度的蜂胶，分别作用24、48、 h后倾去上清液，加入DMSO充分溶解形成的结 72h后，加入MTT，4 晶，用酶标仪测OD值(570nm)，并计算抑制率。 2．流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期 收集对照组和不同浓度 蜂胶作用24 h)的细胞，上机进行细胞凋亡分析和细胞周期分析。 3．透射电镜观察细胞超微结构蜂胶作用于Hep．2细胞48h后，各组 收获1×107个细胞样品，洗涤，2％戊二醛和1％四氧化锇双固定，常规 包埋、聚合、切片，醋酸双氧铀、铅染液染色。透射电镜下观察，照相。 mRNA在6孔细胞 4．逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)p53和Bcl．2 6、20h后提 u咖l蜂胶作用4、8、12、I 培养板上培养Hep一2细胞，80 取RNA，进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析。 中文摘要 5．Western 6、20h后，提取蛋白，SDS．聚丙烯 细胞，8099／ml蜂胶作用4、8、12、1 Bcl．2单抗，再加入羊抗兔IgG—HRp，显色反应。 结果： 大、作用时间延长而增大，存在剂量、时间依赖关系(pO．05)。 2．流式细胞技术检测结果显示，不同剂量蜂胶作用24h后均出现不同 各时间组之间抑制率差异有显著性(尸O．05)，具有时间依赖关系。 3．透射电镜可见，蜂胶处理后胞质浓缩，核畸形，染色质高度凝集， 边集，并有典型的凋亡细胞和凋亡小体。 IJg／ml蜂胶处理后， 4．RT-PCR检测结果显示，Hep．2细胞株经80 到20h的0．9(pO．05)。 5．Westem u blot检测结果Hep．2细胞株经80g／ml蜂胶处理后，4h 渐减少为O．7((pO．05)。 结论： 1．蜂胶乙醇提取物能够体外抑制喉癌细胞hep．2的生长，诱导喉癌细 胞凋亡，抑制率、凋亡率有时间、剂量依赖关系，对细胞周期有一定的影 响，G0／G1细胞明显增多，G2／M期细胞减少，非特异性阻滞细胞周期 的全过程，形态学观察可见典型的凋亡细胞及凋亡小体。 作用后Bcl．2mRNA的减少，Bcl．2蛋白表达下调，促进细胞凋亡。 中文摘要 甲基偶氮唑盐比色分析法；流式细胞术；透射电镜；蛋白免疫印迹法；逆 转录聚合酶链反应 英文摘要 ofethanolextractof onthe ofHuman Eff