生物组织中还原糖脂肪蛋白质的鉴定分析.ppt

生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 一、实验目的： ?? 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，能阐明实验原理—颜色反应； 识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，掌握鉴定方法，学会描述实验现象。 二、实验原理 糖类 可溶性还原糖分子中都含有游离的、具有还原性的半缩醛羟基，当与新配置的Cu(OH)2悬浊液混合后，在加热条件下，可将Cu(OH)2还原为砖红色的Cu2O沉淀，而还原糖本身则被氧化为相应的有机酸。 葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH- ? 加热 ? 葡萄糖酸 + Cu2O↓（砖红色）+ H2O 斐林试剂：甲液：0.1g/ mL NaOH溶液 乙液：0.05g/ mL CuSO4溶液 2、蛋白质的鉴定原理 在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NCO—NH—CONH2）能与Cu2+作用，可形成紫色或紫红色的络合物，这一反应叫做双缩脲反应。 由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色（紫色或紫红色）反应。 3、脂肪的鉴定原理： 苏丹染料在脂肪中的溶解度大于酒精中的溶解度，用含苏丹染料的酒精处理含有脂肪的生物组织时，酒精中的苏丹进入脂肪中，在脂肪中溶解、积累，并吸附在脂肪颗粒结构上，呈现出橘黄色（苏丹Ⅲ）或红色（苏丹Ⅳ）。 三、实验器材 实验材料：梨、花生、鸡蛋清； 实验器械：双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜； 实验试剂 1．斐林试剂（现配现用---甲液：乙液=1:1） 甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液 乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液 2．双缩脲试剂 A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液 B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液 3．苏丹Ⅲ染液 4．体积分数为50%的酒精溶液  1、可溶性还原糖的鉴定 制备生物组织样液? ? 取样? ? 注入 试剂? ? 加热（2分钟左右），观察 四、实验步骤 2、蛋白质的鉴定制备组织样液（蛋白稀释液） 注入试剂A 注入试剂 B? ? 观察颜色变化 四、实验步骤 3、脂肪的鉴定制备生物组织实验材料? 染色???? 去浮色? 制作临时装片，放在显微镜下观察（先低倍镜后高倍镜） 五、注意事项 1、注意实验安全。食用酒精灯时小心烧到自己或他人；使用双面刀片时小心割伤手。 2、还原糖鉴定中所用的斐林试剂必须现配现用。 3、双缩脲试剂的使用，应先加试剂A（造成碱性的反应环境后)，再加试剂B。试剂B加3—4滴，千万不要加多。 4、制作切片过程中，染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色。观察时要找最薄处，最好只有1～2层细胞。 1、可溶性还原糖的鉴定制备生物组织样液? （取材，研磨，过滤）? 取样? （取2ml组织样液注入试管?） 注入试剂? （向试管中加入2ml刚配置的斐林试剂?） 加热（2分钟左右），观察 2、蛋白质的鉴定制备组织样液（蛋白稀释液） （2ml?） 注入试剂A（? 加入2ml双缩脲试剂A?）? 注入试剂B? （滴入3～4滴双缩脲试剂B，摇匀）? 观察颜色变化 3、脂肪的鉴定制备生物组织实验材料? (去种皮，削平面，切片）? 染色??（滴2～3滴苏丹Ⅲ染液染色1分钟）?? 去浮色? （滤纸吸去多余染液，在在玻片上滴1～2滴体积分数为50%酒精溶液，洗去浮色??） 制作临时装片，放在显微镜下观察（先低倍镜后高倍镜） 六、实验结果 检测生物组织中的还原糖 六、实验结果 检测生物组织中的蛋白质 六、实验结果 检测生物组织中的脂肪 七、思考题 1、在做可溶性还原糖鉴定实验时，植物组织取材条件？（答） 2、双缩脲试剂A和B在实验过程中加入的顺序是否可以改变？（答） 3、