分泌型IgA嵌合抗体基因构建及在CHO细胞中表达研究.pdf

分泌型IgA嵌合抗体基因的构建及在CHO细胞中的表达研究 摘要 分泌型IgA(SIgA)是人体粘膜表面的主要抗体，是抵御病原体侵袭的第一道免疫防线。目前为 止尚没有人尝试在动物呼吸道或消化道使用分泌型lgA阻断HSNl病毒的感染。由于禽流感的感染 途径主要是呼吸道或消化道，呼吸道或消化道SlgA极有可能在病毒感染的最初阶段产生最好的保 hamster 护效果。本研究选择在中国仓鼠卵巢(chineseovary,CliO)细胞中表达具有中和活性的抗 H5N1病毒的嵌合SIgA抗体，尝试研发预防性分泌型IgA类抗体。 采用本实验室建立的“基冈组DNA剪接(Oenomic 人I口、plgR和IGHA的核苷酸序列，通过计算机软件分别设计各个基因片段外显子的优化引物， 从人外周血基因组DNA中直接扩增各基因的外显子序列；然后人工设计融合相邻外显子的融合引 物，采用重叠PCR技术，把各基因片段的外显子串联起来形成全长编码序列，完成基冈组DNA的 Vector中。序列分析表明，GDS技术扩增 体外剪接，扩增的PCR产物纯化后克隆到pGEMoTEasy 序列。 I家族。 酸编码20个氨基酸前导序列，V段为IgKVIII家族，J段为IgKJ 合IgA抗体基因的构建。将人／鼠嵌合19A抗体重、轻链基因分别克隆剑以CMV早期启动子引导， 掉，从而完成人分泌成分(secretorycomponent，SC)的真核表达载体构建。 胸腺嘧啶的DMEM)筛选，挑取阳性克隆．I{jMTX加压进一步提高表达量。对此细胞株扩大培养并 血清的CHO细胞培养上清中纯化重组人源抗H5N1．HA IgA抗体，并进行免疫学特性的分析。同时 CHO／dhfr‘细胞，培养48．72 h的细胞上清，使刚ELISA检测嵌合SlgA抗体各组分的分泌情况。 V区基因，并对该V区基冈序列进行胚系基因片段的分析；获得了完整人-鼠嵌合lgA抗体基冈： 关键词：禽流感病毒；嵌合SlgA抗体；中国仓鼠卵巢细胞；基因表达 Constructionchimeric A SecretoryImmunoglobulinantibody its inHamster and Cells gene expression Ovary Abstract the classinthesecretionsthatbathethemueosal ImmunoglobulinA(19A)，asprincipalantibody asthefirstlineofdefence．Sofarthereisno HSNlvirus surfaces，acts attemptusingsecretoryIgAagainst tract．Inthis weused to inanimal tractor Chinesehamster digestive study respiratory ovary(CHO)cells an chimericinorderto a foravian