慢性心理应激影大鼠细胞自噬功能的时相性研究.pdfVIP

本研究属广东省高等学校高层次人才项目一从细胞自噬探讨肝主疏泄功能实质 的研究，项目编号：A1一AFD004132A04。 摘 要 目的： 把慢性心理应激与中医情志病联系起来，根据中医七情内伤，最先伤肝的病因 理论，观测比较不同的慢性心理应激时间所导致的病位演变及证候变化规律，以及 海马神经细胞、肝细胞等体细胞内自噬活动的变化情况。为下一步中医药抗应激损 伤的动物实验研究摸索最佳造模时间，也为从细胞自噬角度阐释肝主疏泄的藏象理 论提供实验依据。 方法： 根据旷场实验5分钟活动距离，大鼠随机分为空白组、造模lO天组、造模20 天组、造模30天组和造模40天组5组，六种造模方法(禁食、禁水、冰水游泳、 夹尾、电击、束缚)随机安排在实验过程中，以旷场实验判断慢性心理应激模型的 建立时间，酶联免疫法分析大鼠血清胃动素、胃泌素，慢性心理应激对大鼠海马CAl 区神经细胞自噬体的影响，慢性心理应激对大鼠海马神经细胞、肝细胞自噬相关蛋 白表达的影响。 结果： 1、慢性心理应激对大鼠空间记忆及学习能力和抑郁情绪的影响 各组大鼠造模前旷场实验活动总路程无差异(PO．05)。造模后，与空白组相 比，5分钟活动总路程造模10天组距离缩短，但无差异(PO．05)；造模20天组 活动距离明显缩短，有差异(PO．05)；造模30天组、40天组活动距离缩短，有 明显差异(PO．01)。前3分钟活动总路程，与空白组相比，造模10天组活动距 离缩短，有差异(尸O．05)；造模20天组、造模30天组、40天组活动距离明显 缩短，有显著差异(PO．01)。 2、慢性心理应激对大鼠胃肠激素的影响 各组大鼠造模结束后取血，测定血清胃动素、胃泌素，与空白组相比，造模10 天组血清胃动素下降，有差异(PO．05)；造模20天组、30天组、40天组胃动素 下降明显，有显著差异(PO．01)。与空白组比较，造模lO天组、20天组血清胃 泌素下降，但无差异(PO．05)；造模30天组、40天组下降明显，与空白组相比 有差异(PO．05)。而且随着造模时间的延长，大鼠血清胃肠激素呈逐步下降趋势。 3、慢性心理应激对大鼠细胞自噬相关指标表达的影响 3．1慢性心理应激对大鼠细胞自噬相关蛋白TSC2的影响 各组大鼠造模结束后取材进行倒置显微镜观察，免疫组化染色后细胞质显示黄 褐色，核呈现蓝色。空白组大鼠海马区显示，黄色区域分布少，造模10天组与空白 组相比阳性表达率上升，但无差异(胗O．05)；造模20天组与空白组阳性表达率 相比，上升，有差异(PO．05)；空白组与造模30天组、40天组相比有显著差 异(PO．01)。空白组大鼠肝索清楚，细胞形态清晰，造模10天组与空白组相比 比有显著差异(PO．01)。 3．2慢性心理应激对大鼠细胞自噬相关蛋白ULKl的影响 海马神经细胞中ULKl的表达，造模lO天组与空白组相比阳性表达率上升，但 空白组与造模30天组、40天组相比有显著差异(PO．01)。空白组大鼠肝索清楚， 细胞形态清晰，造模10天组与空白组相比阳性表达率上升，但无差异(尸湖．05)； 造模20天组与空白组阳性表达率相比，上升，有差异(PO．05)；造模30天组、 40天组与空白组阳性表达率相比有显著差异(PO．01)。 4、慢性心理应激对大鼠海马CAl区自噬体的影响 各组大鼠造模结束后取材进行透射电子显微镜观察，比较海马细胞内的结构， 空白组大鼠可见海马神经细胞胞壁完整，胞浆充盈，细胞形态清晰，无肿胀坏死， 有少数自噬体可见；造模10天组海马神经细胞胞壁相对完整，胞浆充盈，肿胀坏死 较少，细胞的结构形态清晰，自噬体数量少；造模20天组海马神经细胞胞壁较完整， 胞浆相对充盈，肿胀坏死少，可见少量自噬体；造模30天组海马神经细胞胞壁不完 整，胞浆少，肿胀坏死，双层膜包裹的自噬体数量较多，内含待降解物；造模40 天组海马神经细胞胞壁破坏，肿胀坏死，可见大量双层膜包裹的自噬体或自噬溶酶 体，胞质模糊不清，含有较多待降解物，核内染色体弥散不清。空白组大鼠海马Chl 区的自噬体数目明显少于造模组，与造模10天组无差异(PO．05)，与造模20 组自噬体数目最少，而造模40天组自噬体数目最多。 ’ 结论： 旷场实验有效的测定了慢性心理应激的造模时间，慢性心理应激影响大鼠的学 习记忆能力并出现情绪抑郁，旷场实验中，应激时间越长，抑郁越严重，旷场活动 距离越短。通过对旷场实验活动距离的测定及比较，将