湖北麦冬规范化植及其提取物的降血糖作用研究.pdfVIP

中文摘要 湖北麦冬(Liriopespica Ma)为((中华人民共和国药典》(1995年、2000年和2005年版)收载中 xLir 药品种“山麦冬”(Radiiopes)的主要来源植物，具有悠久的药用历 史，早在宋代((图经本草》和《证类本草》中均有湖北“随州麦门冬的 记载，据其药图考证，与现今药用的湖北麦冬基本一致。 湖北麦冬是湖北的特有物种和道地药材，主产于湖北省襄樊市，种 植面积已达5万余亩，年产量近两万吨，约占全国麦冬类药材总产量的 50％以上，是当前麦冬商品药材的主流品种，种植湖北麦冬成为-3地农民 脱贫致富的主要产业之一。 本论文在中医药理论指导下，运用分子生物学、中药栽培学、中药 鉴定学、药理学等多学科交叉的方法对湖北麦冬及麦冬类植物ISSR鉴别、 规范化种植、药用部位的选择与扩大、有效成分的提取分离、药效学及产 业化开发等进行全方位系统研究，深入研究和证实湖北麦冬的药用价值， 真正提高湖北麦冬的产量、质量和品牌知名度，为湖北麦冬的产业化开发 奠定基础。 1．湖北麦冬规范化种植研究 1．1研究目的：对湖北麦冬进行规范化种植(GAP)研究，对湖北麦冬药 材生产实施全面质量管理，控制影响药材质量的各种因子，规范药材生产 的各个环节乃至全过程，以达到湖北麦冬药材“安全、有效、产量稳定、 质量稳定、可控”的目的。形成优质、高产、无公害的模式化栽培技术， 制定出行之有效的中药材生产、质量管理标准操作规程和企业质量标准， 更好地指导中药材种植，从而提高湖北麦冬产量和质量。 1-2研究方法：以《中药材生产质量管理规范(GAP)实施指南》为指导， 主要针对湖北麦冬的生长特性、种植历史和规模、产地生态环境、物种鉴 定、种质来源、野生资源分布情况、生长习性、良种繁育情况、适宜采收 期、病虫害综合防治情况、质量控制、种植流程及关键技术控制点、产地 生态环境检测(包括土壤、灌溉水、大气环境)、企业质量标准、取样方 法、生产标准操作规程(SOP)、管理规程、技术标准、岗位职责等方面进 行研究。 1．3研究结果：通过对湖北麦冬开展规范化种植研究，建立了一套较为 完整、规范的栽培、种植、初加工的生产和质量体系。制定出了《湖北麦 冬种苗标准》、《湖北麦冬生产标准操作规程》(SOP)、《湖北麦冬企业质量 标准》等。并能卓有成效地指导基地生产实践，提高了湖北麦冬的产量、 质量和品牌知名度。 1．4研究结论：实施湖北麦冬规范化种植(GAP)研究，能从源头上控制 湖北麦冬药材质量，对保证湖北麦冬药材、湖北麦冬饮片及湖北麦冬中成 药质量具有十分重要的意义。 2．湖北麦冬及其他麦冬类植物I$SR鉴别研究 2．1 研究目的：对从形态上难以区分的湖北麦冬、短葶山麦冬、川麦冬、 阔叶麦冬和细叶麦冬等麦冬类植物，利用ISSR分子标记技术进行鉴别研 究，并研究其亲缘关系。 2．2研究方法：选择索莱宝植物基因组DNA提取试剂盒提取样品总 DNA，检测其浓度，将产物置于一20C低温保存备用；根据预实验，设计 五因素四水平正交实验，进行PCR反应体系的优化；从ISSR引物序列表 中随机选取80条，按照正交试验优化确定的反应体系，对所有样品进行 PCR扩增，选取对各样品均能稳定扩增出三条以上电泳条带的引物作为实 验有效引物；对PCR扩增产物用1．5％琼脂糖凝胶分离检测，在凝胶成像 分析系统下检测提取效果并拍照；统计各样品的电泳条带，得到全部样品 数，进行UPGMA聚类分析，构建聚类系统树状图。 2．3研究结果：通过正交优化实验建立了反应稳定、重复性好、条带清 晰的最佳ISSR反应体系和PCR扩增程序；对麦冬类植物用此反应体系进 行有效引物筛选，从80条引物中筛选出了9个有效引物，根据有效引物 扩增结果进行聚类和相似系数分析，结果证明麦冬类植物亲缘关系十分接 近，属于同一种群，其中湖北麦冬和短葶山麦冬亲缘关系较近，川麦冬和 阔叶麦冬亲缘关系较近，这与传统分类及与品种鉴定结果相符。 2．4研究结论：ISSR分子标记技术可用于麦冬类药材及近缘种的鉴别。 3．湖北麦冬提取物(总多糖和总皂苷)的制备 3．1 研究目的：研究利用大孔吸附树脂同步提取、分离和纯化湖北麦冬 中总多糖和总皂苷，并制定制备流程。 3．2研究方法：对湖北麦冬药材进行水提，利用经过预处理的大孔吸附 树脂分离湖北麦冬中的总多糖和总皂苷，利用旋转蒸发及醇沉的方法纯化 总多糖和总皂苷，并进行含量测定。 3．3研究结果：通过大孔吸附树脂同步提取