抗氧化乳酸菌的选及其对氧化损伤的CT-26细胞的保护作用.pdf

摘要 抗氧化乳酸菌筛选及其对氧化损伤的CT-26细胞的保护作用 学科、专业：营养与食品卫生学 入学时间：2007年8月28日 硕士研究生姓名： 杨静秋 答辩时间：2009年12月10日 指导教师： 孙震 日 授予学位时间：2009年月 摘要 目的：从乳酸发酵食品中分离筛选具有较高抗氧化活性的乳酸菌，研究其抗氧化能 力并初步探讨其作用机制，为开发功能性乳制品提供理论依据。 方法：以体外清除DPPH的能力为指标，在相同菌量条件下，从32株受试菌株中 筛选出具抗氧化活性的乳酸菌，正交实验优化其发酵条件，以最大程度上提高其抗氧化 水平。小鼠结肠癌细胞CT-26传代培养后分为对照组、模型组和乳酸菌干预组。模型组 mmol／L 用含O．45 H202(终浓度)的RPMI．1640培养基作用于细胞2h建立损伤模型，干 预组将109cfu／mL的具抗氧化活性的乳酸菌与含O．45mmol／L 于37℃孵育3 h，过滤除菌后取上清作用于细胞2h，分别测定各组细胞活力(MTT法)， 测定上清液LDH、MDA及SOD含量，扫描电镜观察细胞表面形态，Hoechest33342染 色检测细胞核变化，HepG2细胞辅助验证受试菌对其保护作用。 结果：从受试的32株乳酸菌株中，筛选得到一株具有较强抗氧化能力的嗜酸乳杆 率为指标，从接种量、培养基初始pH值、培养时间、培养温度、吐温种类、生长因子 种类及添加量，碳、氮源种类及添加量等多个方面对筛得菌株的生长条件进行了优化， 并就碳、氮源及生长因子(乳糖和豆芽汁)添加量等对清除DPPH自由基影响较大的因 素进行了正交实验，确定了筛得菌株的优化培养基及最佳培养条件。优化培养基成分为 乳糖1％，豆芽汁12．5％，葡萄糖2．5％，蛋白胨：牛肉浸膏=1：1，其余同MRS培养基。 h，吐温．80 最佳培养条件为：接种量为3％，培养基初始pH值为6．4，37℃下发酵20 增至(159．50士22．20)％。体外细胞培养研究结果表明：干预组细胞活力显著高于模型组 于模型组(尸0．01)；扫描电镜下模型组细胞表面微绒毛消失，出现大量凋亡小体，干 预组形态接近J下常；模型组经HoechSt．33342荧光染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光， 干预组呈弥漫均匀荧光。 H202造成的氧化损伤，其作用机制可能与乳酸菌可以清除自由基(活性氧)等有关。 关键词：抗氧化；乳酸菌；优化；氧化损伤：结肠癌细胞。 Abstract Abstract conducted was toscreenantioxidativelacticacid Obiective：Thisinvestigation bacteria。 the wasalsocarriedouttoresearchitsmechanismoxidative experiment through damaged CT-26cellmodel． Methods：A Wasscreened lacticacidbacteria its of bymeasuringabilityscavenging DPPHfreeradical．anditsmediumand conditions