抗戾饮对呼吸道状病毒感染模型影响的实验研究.pdf

中文摘要 acute 传染性非典型肺炎，世界卫生组织命名为严重急性呼吸系统综合征(severe respiratory 进展快，危害大等流行病特点。对人生命健康和经济发展影响甚大。 目前现代医学对SARS主要采用对症支持疗法，国内外也长期致力于抗病毒药物 的研制及疫苗的开发。但是一项新的药物研发周期长，且病毒结构和入侵部位的特殊 性，及病毒容易产生变异，使疫苗的研制难以跟上传染病不断变化和增多的现况。因 此寻找有效的抗冠状病毒药物，是全世界和我国疾病防治中的重点。 中医药防治病毒性传染病具有一定的优势，彭胜权教授根据既往治疗呼吸道病毒 感染疾病的经验以及本次SARS发病特点，拟清热利湿、和胃化痰中药复方抗戾饮(蒿 芩清胆汤合升降散化裁)治疗早中期SARS，临床疗效显著。 实验室SARS模型建立存在很多的安全隐患，我们目前实验室的安全状况不能满 属，是动物冠状病毒属中唯一可以引起呼吸道感染的病毒，最近研究也发现 只的急性呼吸道传染性疾病，但是它对工作人员及环境在一定实验室条件下并无任何 威胁，因此我们考虑选用IBV替代SARS-CoV作为我们模拟呼吸道冠状病毒感染模 型的建立。 本项目正是基于以上背景而立题，试图建立安全的体内非SARS类呼吸道冠状病 毒感染替代模型，从实验的角度客观评价中药复方制剂抗戾饮的作用环节，部分阐明 其抗呼吸道冠状病毒感染的机制，为进一步推广应用提供科学依据。 一抗戾饮体外抗呼吸道病毒实验研究 目的：探讨抗戾饮对体外培养的三种呼吸道病毒RSV(呼吸道合胞病毒)、Ad3 (腺病毒)、FMl(甲型流感病毒)治疗效果。方法：首先分别进行中药抗戾饮对MRC一5 活性的测定以及在MDCK细胞中抗FMl活性的测定。结果：抗戾饮对MRC一5细胞 及MDCK细胞的半数毒性浓度(TC50)分别为7．62 mg，mI，21．33mg／ml，最大无毒浓 mg，ml。抗戾饮 体外培养的MRC一5及细胞株的毒性较大，且对体外培养的三株呼吸道病毒(RSV、 Ad3、FMl)均无明显的治疗作用。 二抗戾饮对呼吸道冠状病毒体内感染模型的影响 1呼吸道冠状病毒旧V的增殖与鉴定 目的：建立可靠的IBV鉴定和诊断方法。方法：1、首先将IBV-M41接种于94 10日龄鸡胚绒毛尿囊腔，37。C孵育，48h后收获。2、用鸡胚矮小化实验及对新成疫 Disease 病毒B1株(Newcastle 的引物，对鸡胚尿囊液中IBV进行RT-PCR鉴定。结果：鸡胚矮化及干扰实验均成阳 性，初步鉴定IBV的存在。尿囊液RT-PCR成功扩增出IBVN基因特异条带，其大 小与预计相吻合。结论：鸡胚矮化实验及鸡胚干扰实验等方法，在鉴定IBV毒株方面 具有一定的参考价值。基于IBV病毒基因组设计的引物对鉴定IBV有较好的特异性， 是鉴定|BV的一种较准确、快速的方法，具有一定通用性。 2呼吸道冠状病毒IBV感染雏鸡模型研究 目的：建立IBV感染雏鸡的发病模型。方法：利用滴鼻、点眼方法将呼吸型IBV-M41 接种7目龄雏鸡，对照组接种生理盐水，然后置于具有可调控的低温高湿环境中饲养。 观察雏鸡发病的一般症状、呼吸道症状、体重、肛温，并将出现临床症状的雏鸡剖杀， N基因及3’末端UTR基因序列的引物，对雏鸡肺及支气管组织中IBV进行RT-PCR 鉴定。结果：接种IBV后，在低温及潮湿环境的刺激下，雏鸡表现有体温逐渐升高致 高热、喷嚏、咳嗽、呼吸罗音、呼吸困难及食欲不振、便溏、萎靡不振、昏睡等临床 表现。病理上表现为典型的肺与支气管病交的支气管炎病症。组织RT-PCR成功扩增 出IBVN基因特异条带，其大小与预计相吻合。结论：利用呼吸型IBV-M41标准毒 株加模拟发病模型环境(寒冷刺激加潮湿环境)，可以成功复制出IBV雏鸡感染模型。 该模型在一定程度上还符合呼吸道病毒感染所引起的中医证候(湿热壅滞、肺失宣降) 的特点。 3抗戾饮对人工致雏鸡感染呼吸道冠状病毒感染的影响研究 目的：研究抗庆饮对IBV感染雏鸡中医证候改善情况，并评价抗戾饮对旧V模型 组织中IBV