染矽尘大鼠肺组TGF-βlt;,1gt;的表达及其对Ⅰ、Ⅲ型胶原的调控.pdf

中文 摘 要 染矽尘大鼠肺组织TGF-311的表达及其对I、III型 胶原的调控 摘 要 目的:本实验以染矽尘大鼠模型为对象，以组织芯片技 术为手段，旨在阐明染矽尘大鼠早期TGF-0,的表达及其对 11111型胶原的调控口具体地讲，本实验主要探讨如下两个 问题:1、染矽尘大鼠不同时间点肺组织TGF-A.表达的变 化;2、染矽尘大鼠不同时间点肺组织I、III型胶原的变化; 3、染矽尘大鼠肺组织TGF-3(，对I、III型胶原的调控作用。 方法:本实验采用清洁级Wistar大鼠%只，体重200-240 克。随机将大鼠分为2组，即对照组和染矽尘组，每组48 只。对照组大鼠气管内注入生理盐水，染矽尘组大鼠气管内 注入矽尘混悬液口 气管暴露法建立大鼠矽肺模型。对照组动物气管内注入 1ml0.9%NaCl溶液，染矽尘组气管内注入浓度为50mg/ml 的矽尘混悬液lml。模型建立后，每组分6个时间点(Id,3d, 7d, 14d,21d,28d)分别取8只大鼠将其处死。HE染 色观察大鼠肺组织矽结节。天狼猩红染色法结合偏振光显微 镜观察工、m型胶原及矽尘颗粒。用组织芯片仪制作组织芯 片，用SP法检测组织芯片TGF-0,的表达情况。对选定的 视野用 NikonEclipseE800偏振光显微镜观察，用 WVCP240/GPanasoniccolourCCTVCamera摄像并存入计 算机，然后用Image-ProPlusVersion4.5forwindowsTM图象 分析系统进行定量分析。用HueIntensitySaturation(HIS) 中文 摘 要 颜色分割法选定阳性目标区域。用阳性区域的面积百分比代 表胶原含量。用阳性细胞的积分光密度代表TGF-R,蛋白表 达量的多少口所有数值均用、全:表示，在不同时间点，两 组间比较用t检验，以P0.05作为显著性差异的水准。全 部数据的统计学处理均采用 SPSS11.5forwindows分析软 件。 结果:1形态学观察结果 :(1)动物模型肺组织HE染 色结果各时间点对照组肺组织结构基本正常口注入矽尘后第 3d时，细胞性结节开始在肺泡腔内形成。细胞性结节主要由 吞噬矽尘颗粒的巨噬细胞、上皮样细胞、泡沫细胞、多核巨 细胞、淋巴细胞和少量中性粒细胞组成口7d时，成纤维细胞 增生和胶原纤维形成伴玻璃样变。14d时，肉芽肿进行性纤 维化，成纤维细胞增生并平行排列。随着染矽尘时间增加， 正常肺组织结构大部遭到破坏。(2)I、III型胶原天狼猩红 染色的偏振光镜观察结果:对照组肺泡隔正常。ld时，染矽 尘组肺泡腔内矽尘颗粒成堆存在。3d时，在肺泡隔之外开始 出现III型胶原 (淡绿色)。7d时，I型胶原(桔黄、深红色) 开始增加。14d后两种胶原均呈直线上升趋势。 (3)TGF-0,的免疫组织化学染色结果:对照组有极少量 TGF-13:在巨噬细胞内表达。染矽尘组在注入矽尘后ld，肺 泡腔内出现TGF-0,阳性细胞，主要是巨噬细胞。3d时，TGF- P,阳性细胞明显浸润。7d时，肺部TGF-0,阳性细胞浸润 达高峰，布满整个视野，TGF-0.主要表达在绝大多数的巨 噬细胞和中性粒细胞。14d时，TGF-0，表达逐渐减少，28d 时基本接近对照水平。 2定量分析结果:(1)染矽尘大鼠不同时间点肺组织 TGF- 中文 摘 要 I31阳性细胞积分光密度的变化 对照组与染矽尘组在 Id, 3d和28d时差别无统计学意义。在7d,14d和21d的差别有 统计学意义((P0.05)。从两组均数的差别和其95%CI可以看 出:两组之间的差别在7d时最大，14d和21d逐渐降低，间 接反映了在染矽尘7d时，大鼠肺组织中TGF-0,表达最多。 (2)染矽尘大鼠不同时间点肺组织I型胶原面积百分比的 变化 与对照组比较，染矽尘组各时间点I型胶原面积百分 比均有不同程度的增加，7d,14d,21d和28d时有显著性差 异。28d时，I型胶原面积百分比增加了近I倍。从两组均 数的差别和其95%CI可以看出:两组之间的差别在28d时 最大口间接反