PRMT5通过抑制NF-kappa;B削弱DR4介导的趋化因子CCL20释放.pdfVIP

2013 年 第 58 卷 第 9 期：810 ~ 814 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS PRMT5 通过抑制NF-κB 削弱DR4 介导的趋化因子 CCL20 释放 ①② ① ① ① ① ①* ①* 王东生 , 刘丹 , 高静 , 刘敏 , 刘士廉 , 刘彦信 , 郑德先 ① 中国医学科学院基础医学研究所, 医学分子生物学国家重点实验室, 北京 100005; ② 川北医学院附属医院检验科, 南充 637000 * 联系人, E-mail: zhengdx@; liuyx2000@ 2011-12-27 收稿, 2012-02-08 接受 国家自然科学基金资助 摘要 构建表达 DR4 的质粒 pCMV-DR4-HA(DR4) 和表达 PRMT5 的质粒 pCMV- 关键词 PRMT5-Flag, 共转染293T 细胞, 验证DR4 和PRMT5 的相互作用. 将DR4 和蛋白精氨酸 肿瘤坏死因子相关 N 端甲基化转移酶5 (protein arginine methyltransferase 5, PRMT5)两种质粒分别或者共转 凋亡诱导配体 染293T 细胞, 研究PRMT5 对DR4 引起的炎症因子释放的影响, 探讨PRMT5 抑制DR4 蛋白精氨酸N 端 甲基化转移酶5 (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand receptor 1) 引起炎症因子释放的分子 CCL20 机制. 分别通过RT-PCR 和ELISA 方法对炎症因子的表达进行定量检测. 通过双荧光报告 细胞因子 基因方法检测PRMT5 对DR4 引起NF-κB 活性变化的影响, 并且使用Western Blot 方法检 测ERK 的表达变化. DR4 和PRMT5 在293T 细胞中能相互结合, PRMT5 过表达降低了DR4 引起的NF-κB 活性和ERK 的磷酸化, 导致CCL20 分泌减少. 因此, PRMT5 在293T 细胞 中与DR4 结合, 通过改变NF-κB 和ERK 激酶活性影响了CCL20 的分泌, 参与了DR4 介 导的细胞免疫调节. 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis 可 以 在 很 多 细 胞 系 中 诱 导 细 胞 凋 亡 [4]. 一 旦 与 factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL) 是 TRAIL 结合以后, TRAIL 受体能够募集一系列接头 TNF 超家族的成员[1]. 与 TNF 家族其他成员不同的 分子形成死亡复合物 (death-inducing signaling com- 是 , TRAIL 在体内一般以与细胞膜结合的形式存在 . plex, DISC), 激活经典的凋亡信号通路 . 但是 ,