6高效液相分析.ppt

2.6.4收集器： 液相层析是在无人看管的情况下收集经柱分离后流出物中的各组分。 收集方式：有按保留时间收集、保留体积收集或分离组分收集。 2.6.5记录仪： 将检测到的信号随时记录下来，记录的方式有：单笔记录、双笔记录和计算机记录。 3 层析柱制备技术 3.1层析柱的分类 目前能生产高效液相层析柱的的厂家很多，产品种类繁多。但是从其用途和性能上来分类，可以把高效液相层析柱大致有两类。 (1)按照层析柱型号分类 超微分析柱：这种一般是无填料毛细管柱，主要用于微量高效液相层析(Micro- High Performance Liquid Chromatography，简称Micro-HPLC)的超微量或痕量分析。 微量分析柱：这种柱的内径在1－3mm之间，主要用于高效液相层析的微量分析。 分析柱：这种柱的内径在5－10mm之间，主要用于高效液相层析的常规分析或微量制备。 半制备柱：这种柱的内径在10－20mm之间，主要用于高效液相层析的少量制备，因研究需要制备少量的纯样品。 制备柱：柱内径在20－75mm，主要用于高效液相层析的制备，具有一定得分纯化规模，需要样品的纯度比较高，制备的量比较大，如某些标准品的大量制备。 (2)按照层析柱的填料分类 吸附层析柱：(硅胶、氧化、氧化镁、等) 疏水层析柱：(烷基硅胶，C4、C8、C12、C18、苯基等) 排阻层析柱：(聚苯乙烯、硅烷化的大孔径微粒、灌注层析介质等) 离子交换层析柱：(阴离子和阳离子交换剂) 离子对层析柱：(辛基磺酸反离子、丁铵反离子) 3.2层析柱的性能： 一支层析柱的指标包括柱的形状、结构、层析介质和填充技术等，统称为层析柱技术(column technology)。 3.3层析柱的基本结构 3.3.1层析柱 层析柱主要包括柱管、两端接头、密封圈和塞板等级部分。其简单工作原理是利用接头与压帽的挤压和一定角度的配合，迫是密封圈紧紧抱住柱管，与接头之间形成线密封，使其在高液压下不渗漏。如图9所示。 1柱管，2压帽，3卡套，4筛板，5接头，6卡套，7螺丝，8输液管 3.3.2柱管的材质 高效液相层析柱大多数都是以不锈钢采质制成的，国际上多是用耐酸碱性较好抗氧化性较强的315和314好不锈钢材，用这种材料制成的柱可以延长其使用寿命 3.3.3柱的填充技术 常用的高效液相层析商品柱，通常是已经填充好的，无需自己填充。但是对于某些特殊的填料或较大型的制备柱，难以购到现成的商品柱，一般需要自己填充。对于制备型柱的填充，根据柱管的粗细有三种填充方法， (1)高压匀浆填充法 对于键合相填料反相层析，以异丙醇为溶剂，配成2%的悬浮液（W/V），用气动泵提供压力，在50-60兆怕的条件下将填料压入柱内，填充速度大约在1cm/min左右。 * 第六讲 高效液相层析 ? 内容摘要 ? 1 高效液相层析发展过程 2 高效液相仪的基本结构 3 层析柱制备技术 4 高效液相层析的分离模式 5 高效液相层析的分析方式 1 高效液相层析发展过程 高效液相层析(High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC)，亦称为高压液相层析。 它是二十世纪60年代末发展起来的一种新型微量分离分析技术。目前已经成为应用极为广泛的、重要的分析手段。 高效液相层析的分离的基本原理与常规液相层析样同，吸取了气相层析微量分析的概念，在液相层析的基础上发展起来一种分离技术。高效液相层析与气相层析最大的区别是流动相，前者是以液体为流动相，后者是以气体为流动相。与常规液相层析的区别是分离柱的有效理论塔板数和分辨率很高。 高效液相层析仪与普通液相层析仪复杂的多，他不仅需要高性能的主机，而且还需要高质量的附属设备。高效液相层析有三高。 高压性能的输液泵：以提高流动相的流速，能够保持恒定的流量。 高分辨率的分离介质：以提高层析柱固定相的分离度。 高灵敏度的检测器：以提高仪器检测的灵敏度，能够准确检测流动相中的痕量组分。因此，高效液相层析具备快速、高效、灵敏等诸多优点。 2仪器的基本结构 目前世界上有几十家公司可以生产高效液相层析仪，每个公司有自己的技术特点，产品都具有高效、快速、灵敏及应用广泛等优点。一些新材料、新技术的在仪器上的应，使得高效液相层析技术有了很大的发展。 尽管各公司生产的仪器都有自己的特点，但是从仪器的基本构件来说，许多地方都是相同的或者相似的。主机的基本结构一般可分为四大系统。 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 此外还有五个辅助部分。