寡克隆区带、2小时鞘内合成率及IgG指数对多发性硬化的诊断价值.pdfVIP

中 文 摘 要 寡克隆区带、24小时鞘内合成率及IgG指数 对多发性硬化的诊断价值 摘 要 多发性硬化 (multiplesclerosis,MS)是一种病因不清的 中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病。由于发病率较高，呈慢性病 程和倾向于年轻人催患，而成为最重要的神经系统疾病之 一。本病临床表现复杂多样，仅依据临床表现，早期诊断较 为困难，故建立行之有效的辅助检查方法尤为重要。免疫球 蛋白鞘内合成是中枢神经系统体液免疫反应的重要标志。24 小时鞘内合成率 (intrathecalIgGsynthesis,IgGSyn)和IgG 指数 (IgGindex,IgGI)可以定量地反映鞘内合成的IgG, 同时测定脑脊液 (cerebrospinalfluid,CSF)和血清的寡克隆 区带(oligoclonalbands,OCBs)，可以定性地反映鞘内合成 的免疫球蛋白。这三项指标在不同人群MS患者中的阳性率 差别较大，诊断价值不一，本研究拟探讨GCBs.IgGSyn 和IgGI对本地区MS诊断的敏感性和特异性。由于等电聚 焦电泳较区带电泳具有更多优势，以其高分辨率、微量样品 量及高灵敏度越来越多地应用于蛋白组分的研究，因此，本 研究应用等电聚焦结合银染色法进行GCBs的检测，并对此 项技术的稳定性和可靠性进行了评价。现将各部分内容概述 如一卜 一、等电聚焦检测寡克隆区带技术的建立 目的:建立等电聚焦结合银染色法检测GCBs的技术， 对该系统的稳定性和可重复性进行评价，并对血清和CSF 中文 摘 要 IgG谱型进行归类，确定OCBs阳性判定标准。 方法:选取2003年 10月一2004年 11月住院病人92 例分为三组，其中多发性硬化 (MS)组30例，神经系统炎 性疾病 (NID)组40例，神经系统非炎性疾病组 (NNID) 22例，均根据相应的诊断标准入选。所有患者于行腰穿检 查时留取无损伤CSF2ml，同时抽取肘静脉血3m1,2000转 /分，离心10分钟，分离血清。CSF和血清均分装冻存于一20 ℃冰箱备用。应用速率散射比浊法测定血清和脑脊液中IgG 浓度，标定配对血清、CSFIgG浓度至同一水平。采用两性 电解质聚丙烯酞胺预制胶作为分离介质，电极液阳极为 1mol/1磷酸，阴性为1mol/1氢氧化钠，距阳极端 1/3处放置 加样滤纸片，依次加入等电点标准品、配对血清和CSF标 本，加样量20ti1。应用三恒电泳仪和水平电泳槽进行等电 聚焦，程序设置为最大电流:20mA，最大功率:6W，最大 电压:500V:40min;650V:20min;800V:20min;900V: 20min;1000V:20min;1150V:3h，时间电压积达2500Vhr 终止电泳。采用银染色法进行蛋白区带的显色，主要步骤包 括:固定、漂洗、银反应、显色、终止，将凝胶放于读片灯 上，进行结果判读，pH6.5-9.5之间的区域为IgG区。对同 一样本、不同批次和同一批次、不同上样量的凝胶结果进行 分析，判断实验的可重复性和寻找最适加样量。将所有患者 配对血清、CSFIgG带型进行归类，以CSF中IgG区出现不 同于血清的2条或2条以上不连续的条带为OCBs阳性，并 判断各组患者GCBs的阳性率。 结果:1.对同一样本、不同批次的凝胶比较，pH6.5-9.5 区域的条带数目相等，等电点位置基本相同。2.同一批次， z 中 文 摘 要 不同_上样量的凝胶，随着土样量的增加，使某些低丰度蛋白 的检出率增加，但同时造成某些蛋白带的融合，本实验方法 的最适IgG加样量为0.6-2.0pgo3.IgG谱型可分为四种: (1)血清和CSF中均为多克隆弥散分布;(2)局限于CSF中的 数条寡克隆区带;(3)CSF和血清中除相同的条带外，CSF中 还存在其特有的条带;(4)CSF和血清中条带相同。4.92例 患者中GCBs阳性36例，其中MS有19例]日‘性，NID有16 例阳性，NNID有 1例阳性。 结论:成功建立了等电聚焦检测寡克隆区带的技术，该 方法具有良好的稳定