专题三真核生物基因表达修改.ppt

第三章 真核生物基因表达调控 THE CONTROL EUKARYOTIC GENE EXPRESSION ? 真核生物基因调控，根据其性质可分为两大类： 第一类是瞬时调控或称可逆性调控，它相当于原核细胞对环境条件变化所做出的反应，包括某种底物或激素水平升降及细胞周期不同阶段中酶活性和浓度的调节。? 第二类是发育调控或称不可逆调控，是真核基因调控的精髓部分，它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。 第二节 转录前的调控（DNA水平的调控） 1.DNA的甲基化与去甲基化 真核DNA中的胞嘧啶约有5%被甲基化为5-甲基胞嘧啶(5-methylcytidine,m5C)，而活跃转录的DNA段落中胞嘧啶甲基化程度常较低。 甲基化可使基因失活，去甲基化又可使基因恢复活性。 2. 染色质结构对真核基因转录的调控 2.1 染色质结构影响基因转录　 常染色质中的基因可以转录，异染色质无基因转录表达。 2.2 组蛋白的作用 组蛋白扮演了非特异性阻遏蛋白的作用， 非组蛋白成分起到特异性的去阻遏促转录作用 核小体结构影响基因转录。 3. 基因重排和基因扩增对基因表达的影响 3.2 基因丢失 在细胞分化过程中，通过丢掉某些基因而去除其活性。例如某些原生动物，线虫、昆虫、甲壳类动物，体细胞常丢掉部分或整条染色体，只保留将来分化产生生殖细胞的那套染色体。 例如在蛔虫胚胎发育过程中，有27％DNA丢失。在高等动植物中，尚未发现类似现象。 许多生物各类不同的细胞或细胞核都具有全能性。 第三节 真核基因 转录水平的调控 1 基因转录的顺式作用元件(cis-acting elements) 顺式作用元件：基因周围能与特异转录因子结合而影响转录的一段DNA序列。 1.1 启动子 (1) 核心启动子成分，如TATA框； (2) 上游启动子成分（UPE），如CAAT框，GC框，八聚体（octamet）ATF结合位点； (3) 远上游顺序（UAS） ：如增强子，酵母中的UAS（upstream activator seguences）减弱子、静息子等。 (4) 特殊细胞中的启动子成分：如淋巴细胞中的Oct（octamer）和κB。 1981年Benerji,Rusconi和Chambom等发现，又称远上游序列（far upstream seguence）。 最早SV40病毒中发现长约200bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍。 100-200bp长度，由若干组件构成，其基本核心组件常为8-12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 负性调控元件，它与转录抑制因子结合抑制转录。 最早在酵母中发现，以后在T淋巴细胞的T抗原受体基因的转录和重排中证实其存在。 沉默子的作用特点： 不受序列方向的影响， 能远距离发挥作用， 并可对异源基因的表达起作用。 1.4 上游激活序列（upstream activating seguences ，UASs） 类似于增强子。 作用： 影响转录程度，对位点选择不起作用。 有方向性，不能在启动子的下游起作用。 结合的转录因子是GCN4和GAL4，识别位点为ATGACTCAT。 1.6 转座因子 2 反式作用因子（trans-acting factors，TF） 反式作用因子（trans-acting factor） ：能调节与它们接触的基因的表达的各种扩散分子（通常是蛋白质），如转录因子；其编码基因与其识别或结合的靶核苷酸序列不在同一个DNA分子上。 转录因子(transcription factor)是起正调控作用的反式作用因子。 转录因子是转录起始过程中RNA聚合酶所需的辅助因子。 真核生物基因在无转录因子时处于不表达状态，RNA聚合酶自身无法启动基因转录。 2.2 反式作用因子活性调节的主要方式 A 蛋白质和DNA相互作用； B 蛋白质和配基结合； C 蛋白质之间的相互作用; D 蛋白质的修饰。 DNA binding domain，BD：100aa，氢键，大沟 transcription active domain，AD：30-100aa regular domain：与其它因子或调控蛋白结合 不与DNA直接结合的转录因子没有DNA结合域，通过转录激活域直接或间接作用与转录复合体而影响转录效率。 1） motif 基序，基元，花式 构成任何一种特征序列或结构的基本单位，是超二级结构。 与DNA结合的功能域常见以下几种结构花式/基元： 锌指（Zinc finger region） 亮氨酸“拉链”式二聚体（leucine zipper）； 螺旋-环-螺旋结构（helix-loop-helix，