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当一种分子被放置在电场当中时，它们就会以一定的速度移向适当的电极。这种电泳分子在电场作用下的迁移速度，叫做电泳的迁移率，它同电场的强度和电泳分子本身所携带的净电荷数成正比。 在生理条件下，核酸分子中的磷酸基团，呈离子化状态。DNA和RNA的多核苷酸链则称多聚阴离子(po1yanions)。 DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正电极的方向迁移。 不同DNA，其分子量大小和构型不同，DNA分子的电泳迁移率就不同，从而可分出不同的区带。 由于在电泳中使用了无反应活性的稳定的支持介质，如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等，从而降低了对流运动，故电泳的迁移率是同分子的摩擦系数成反比的。因此根据分子大小、构型或形状所带的净电荷的不同，便可将各种成分分离开来。 1）琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖是一种天然聚合长链状分子（线性多糖），从红色海藻琼脂中提取而来的良好的电泳介质，其密度是由琼脂糖的浓度决定的。 化学修饰的低熔点(LMP)琼脂糖，在较低的温度下便会熔化，可用于DNA片段的制备电泳。 制胶： 称取 0.8g琼脂糖 ，加100 ml 1×TAE缓冲液于 三角瓶(1/3),摇匀 微波炉加热溶解，当冷却至60℃(不烫手)，加Goodview或EB （终浓度为0.5ug/ml），摇匀 加 0.5×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶2-3cm 竖直向上拔出梳子，将凝胶置于电泳槽中 插入适当的梳子，于室温下冷却凝固 用胶带将制胶板两端封好，倒胶(厚度为4-6mm) 点样： 取PCR产物,每管加3ul含溴酚蓝指示剂的载样缓冲液,混匀后取10ul样品点入加样孔中 电泳： 调电压至3-5V/cm，电泳时间约1-2小时 观察：将凝胶从电泳槽中取出，利用紫外透射分析仪或凝胶成像系统观察，记录结果 注意：凝胶中含有EB（或Goodview），有毒，切勿直接用手接触，废弃胶应集中处理，勿乱扔，不能污染环境； 2）聚丙烯酰胺凝胶电泳 过硫酸胺与TEMED(N、N、N`、N`-四甲基乙二胺)是单体丙烯酰胺的催化剂和诱变剂，它们使单体丙烯胺聚合成长链，长链与长链间就交联成凝胶，链长和交联成决定了凝胶的孔径。 PCR产物每管加入3-4μl载样缓冲液（0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯氰、50%甘油），混匀后用微量进样器取3-4μl注入点样孔 制胶： 称取9.6g尿素，加45ml蒸馏水和8ml 10×TBE，溶解 加12ml 40%丙烯酰胺溶液，搅匀 加入0.8ml 10%过硫酸胺和35μl TEMED，搅匀后立即注入已用琼脂糖凝胶封口的玻璃板中 注满后放平，插入梳子，静置1~2h使胶凝固 点样： 小心拔出梳子，将玻璃板固定在垂直电泳槽上，加入适量的1×TBE电泳缓冲液； 取电泳缓冲液反复冲洗点样孔，清除多余没有凝固的物质； 10×TBE溶液配制：称取108g Tris-HCl、55g硼酸、7.44g EDTA加蒸馏水溶解，定容至1000ml 40%丙烯酰胺溶液配制：称取38g丙烯酰胺、2gN,N’-亚甲基双丙烯酰胺加水 定容至100ml 注意：丙烯酰胺溶液在未凝固前有毒；10%过硫酸胺和TEMED用完后应 置于4℃冰箱中保存。 电泳： 银染： 结果记录： 转入显色液（6g氢氧化钠、0.076g四硼酸钠、1.6ml甲醛，加水定容至400ml）中显色10 min 调电压至300V，电泳时间约3-4h。 将玻璃板从电泳槽上拆下，取出凝胶，在蒸馏水中漂洗2次 转移至0.1% AgNO3溶液中染色10 min；然后将凝胶转移至蒸馏水中漂洗2次； 着色后转入自来水中保存，记录带型结果或凝胶成像 琼脂糖：分辨DNA片段的范围为0.2-50kb之间。 聚丙烯酰胺：分辨范围为1bP-1kb之间。 凝胶浓度：浓度高低影响凝胶介质孔隙的大小，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力也就越强；反之，浓度降低，孔隙就增大，其分辨能力也就随之减弱。 例如：20％的聚丙烯酰胺凝胶的分辨力可达l-6bp DNA小片段，而要分离1000bp的DNA片段，则要用3％的聚丙烯酰胺的凝胶。 再如：2％的琼脂糖凝胶可分辨小到300bp的双链DNA分子，而对于较大片段的DNA，则要用低浓度(0.3％-1.0％)的琼脂糖凝胶。 共显性带型： : 1-亲本1的纯合基因型（aa） 2-杂合体（ab） 3-亲本2的纯合基因型（bb） 0-缺资料 显性带型： 4-非亲本1纯合基因型（ab或bb） 5-非亲本2纯合基因型（ab或aa） 1 3 1