单倍体细胞培养.pptVIP

（2）.看护培养法 特点:把单个细胞置于一块活跃生长的愈伤组织上培养,在愈伤组织和培养的细胞之间,用一块滤纸隔开。 植物花药看护培养图解 （3） 微室培养法 特点：在培养过程中可以连续进行显微观察，把细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。 具体做法将滤纸的两端浸入液体培养基中，使滤纸的中央部分露出培养基表面，将所要的细胞放置于滤纸上进行培养。 Bigot（1976）对该方法进行了改进，制作一特制三角瓶，使其底部一部分向上突起，在突起处放上滤纸，用这种方法的优点是培养物不易干燥。摘自：《植物细胞组织培养》 （4）纸桥培养法 影响单细胞培养的因子： 培养基的成分和初始植板细胞密度是单细胞培养成败的关键。 总结 ~单倍体定义、分类及其特征 ~单倍体如何产生（体内、离体） ~单倍体鉴定及二倍化方法 ~单倍体植物的用途（育种） ~单细胞的获取与培养方法 * * 小孢子母细胞经减数分裂产生4个一群的单倍体细胞，这个发育时期称为四分体（tetrad）。 * 可以避免花药壁、花丝和药隔等体细胞组织的干扰，具有单细胞、单倍性和较高同步性等特点 * 花药供体植株的生长条件对花药培养反应听影响委大。水稻、小麦、大麦等主茎穗诱导率明显高于分蘖穗花药愈伤组织的诱导率。 * 培养基是花药培养中影响花粉启动和再分化的重要条件，培养基成分是否合适往往是决定花药培养成功的关键因素，而且还影响发育的方式。 激素，在此花药的诱导脱分时，需要有较适宜的细胞分裂素和生长素配比，从而有效地诱导花粉细胞启动分裂，同时又控制二倍体细胞的分裂。高浓度的2，4-D主要诱导花药形成愈伤组织，而不能形成胚状体，从而增加了二倍体细胞发育的机会。 包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。不同作物所需最适的碳源种类及浓度的所差异。一般认为单子叶植物比双子叶植物需糖的浓度要高。玉米中蔗糖效果最好；而麦类作物中，麦芽糖似乎为最好的碳源。 * 由四分体刚刚解体成单细胞这一阶段的单倍体细胞称为小孢子。小孢子继续发育，其核进行第一次分裂后形成1个精核（generative nucleus）和1个营养核(vegetative nucleus)的二核细胞；营养核再分裂一次形成2个精核和1个营养核的三核细胞。我们把这种二核或三核细胞称为花粉。在花粉培养过程中，通常是取花粉发育处于单核靠边期和双核早期阶段的花粉细胞进行培养。 花粉培养方法 1、平板培养：花粉置琼脂固化培养基上培养。 2、液体培养： 花粉悬浮在液体培养基中培养，需震荡，以利通气。 3、双层培养：先铺一层琼脂固体培养基（加入失活花药的浸提液），凝固后，在表面加入少量液体培养基培养。 4、看护培养：利用花药或花药愈伤组织释放出的活性物质促进花粉小孢子发育。 5、微室培养：利用小的盖玻片和凹穴载玻片形成微室进行花粉培养。 看护培养图解  1、胚状体发育途径：小孢子经历胚发生的各个阶段，最后子叶展开，形成花粉植株。 花粉植株的形态发生方式 烟草花药培养——通过胚状体途径再生形成小植株 花粉培养 1、胚状体发育途径：小孢子经历胚发生的各个阶段，最后子叶展开，形成花粉植株。 2、愈伤组织发育途径：小孢子分裂数次形成愈伤，再分化形成花粉植株。此途径产生的植株会出现变异且倍性复杂。 四、花粉植株的形态发生方式 花粉培养 愈伤组织转接种到再生培养基 愈伤组织分化形成再生植株 部分花药产生愈伤组织 接种在平板上的水稻花药 水稻花药培养的愈伤化发生途径 花粉单倍体植物的培养程序及其技术关键 花药和花粉培养中的白化苗 影响白化苗形成的因素 花粉发育时期：花药培养中，白花苗的比例随接种时花粉发育时期的延迟而提高。 培养基成分：高浓度的2,4-D会使花粉愈伤组织分化出更多的白化苗 培养温度：当培养温度提高时，白花苗的数目也随之增加。 花药和花粉培养 1、花粉单倍体植株鉴定的理由 1) 体细胞干扰 2) 生殖细胞的自发加倍 三、单倍体植株的鉴定和二倍化方法 2、花粉植株的鉴定方法 1) 形态鉴定 2) 细胞学鉴定 3) 杂交法鉴定 4) 分子标记鉴定 花粉粒着色鉴定原理：凡有活力的种胚在呼吸作用过程中都有氧化还原反应 , 而无活力的种胚则无此反应。当 TTC (2，3，5-氯化或溴化三苯基四氮唑简称四唑)溶液渗入种胚的活细胞内 , 并作为氢受体被脱氢辅酶上的氢还原时 , 便由无色的 TTC 变为红色的三苯基甲 (TTF) ，从而使种胚着色。当种胚生活力下降时 , 呼吸作用明显减弱 , 脱氢酶的活性亦大大下降 , 胚的颜色变化不明显 , 故可由染色的程度推知种子生活力强弱。 单倍体植株如何加倍 ◆ 自然加倍（花粉植株并不象预期都是单倍体） ◆ 人工诱导加倍（如：秋水仙素处理） ◆ 从