发酵——菌种来源.pptVIP

HD:高丝氨酸脱氢酶 黄色短杆菌中赖氨酸的合成调节机制 HT:高丝氨酸转乙酰酶 AK:天冬氨酸激酶 结构类似物抗性：Lys的类似物AEC,Thr的类似物AHV 营养缺陷型：如Thr缺陷型 黄色短杆菌F9-50的诱变谱系 Bervibacterium flavum As 1.495 (leu-) lys.HCl 2.1 g/l F6-16 (leu -, Thr -) 20.8 g/l F9-50 (leu -, Thr -, AEC r) 33.5 g/l 三、基因的直接进化(directed evolution) 突变 基因突变库的建立 筛选 基因突变库的筛选 基因复制与遗传 步骤： 在分子水平上，对目标基因直接处理，然后通过高通量的筛选方法，提高目标蛋白的性能。 定点突变 错位PCR DNA Shuffling:指DNA分子的体外重组，是基因在分子水平上进行有性重组(Sexual Recombination)。 基因重组 质粒载体 DNA扩增 PCR反应 重组DNA的鉴定 遗传学方法 类 型 示 例 特 性 活性增加倍数 潜在应用领域 抗 体 人源抗体 亲和性 400 生物制药 酶 天冬氨酸转氨酶 催化特异性 10，000 生物制药 β -内酰胺酶 抗生素抗性 32，000 抗生素 枯草杆菌蛋白酶E 耐热性 65℃耐热时间 17 200 工业酶 细胞因子 人类干扰素 抗病毒 285，000 基因治疗 肿瘤抑制因子P53 37℃半衰期 12 基因治疗 代谢途径 砷酸盐代谢途径 砷酸盐解毒 40 生物制药 汞代谢途径 汞解毒 12 生物制药 部分DNA Shuffling技术的研究成果 主要应用： 酶学性能的提高: pH 温度 有机溶剂 生理环境→工业催化环境 底物专一性 脂酶拆分2-甲基癸酸硝基苯酯 例： PLA PLA光学拆分选择性(%) 2 31 57 75 81 90 5次错位PCR 2次定点突变 Reetz (1997) Liebeton(2000) 学习动物精神 11、机智应变的猴子：工作的流程有时往往是一成不变的，新人的优势在于不了解既有的做法，而能创造出新的创意与点子。一味 地接受工作的交付， 只能学到工作方法 的皮毛，能思考应 变的人，才会学到 方法的精髓。 学习动物精神 12、善解人意的海豚：常常问自己：我是主管该怎么办才能有助于更好的处理事情的方法。在工作上善解人意， 会减轻主管、共 事者的负担，也 让你更具人缘。 第二章：菌种的来源 微生物的特性及工业微生物的要求 一些工业化产品生产菌种的特点 自然界中有目的微生物分离的原则 菌种选育、分子育种 第一节 微生物的特性及工业微生物的要求 一、微生物的特性 有些微生物能在厌氧的条件下生长 有些微生物能够利用简单的有机物和无机物满足自身 的生长 有些微生物能进行复杂的代谢 有些微生物能利用较复杂的化合物 有些微生物能在极端的环境下生长 二：工业化菌种的要求 能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成 产物 有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造的 可操作性要强 遗传性能要相对稳定 不易感染它种微生物或噬菌体 产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病 菌无关） 生产特性要符合工艺要求 放线菌（链霉素四环素；红霉素等） 真菌（青霉素、头孢等） 一些产芽孢的细菌 植物或动物来源 一、抗生素生产有关的微生物 抗生素是次级代谢产物，需要生物体进行复杂的代谢，目前发现的生物来源如下： 第二节 已工业化产品生产菌的介绍 放线菌产生的主要抗生素 链霉菌 稀有放线菌 氨基糖苷类 氯霉素 链霉素 环丝氨酸 林可霉素 新生霉素 小单胞菌 氨基糖苷类 大环内酯类 肽类 游动放线菌 缩酚肽类 肽类 多烯类 诺卡氏菌 氨基糖苷类 氯霉素 链孢囊菌 氨基糖苷类 优胜霉素 普拉克托霉素 二、氨基酸生产有关的微生物 代谢控制发酵：用人工诱变的方法，有意识地改变微生物的代谢途径，最大限度地积累产物，这种发酵形象地称为代谢控制发酵，最早在氨基酸发酵中得到成功应用。 50, 60年代以氨基酸发酵为代表的代谢控制发酵，是发酵工业发展历史上的一个转折点： HD:高丝氨酸脱氢酶 黄色短杆菌中赖氨酸、苏氨酸、蛋氨