反义RNA原理及其应用.pptVIP

反义RNA的原理及其应用实例 制作人：余萍 反义RNA 反义RNAA( a n t i s e n s e R N A）：一种本身缺乏编 码能力， 但能与特异靶 R N A( 主要是mR N A) 互补的 R NA分子， 它可通过配对碱基间氢键作用与靶 R N A的特定互补区域结合形成双链复合物， 抑制靶 RNA的功能， 从而调控基因的正常表达 。 基本原理 反义 R N A技术的基本原理：利用自然存在的或人工合 成的反义 RNA， 通过基因重组技术反向插入到合适 的表达载体形成重组DN A， 然后转染受体细胞， 则 这一反插入的序列就会随细胞周期产生大量反义 R NA， 对基因的表达进行调控， 从而抑制、封闭或破坏靶基因的表达。 一、复制水平 DNA复制 中的作用 反义 R N A作为D N A复制的抑制因子， 与引物 R N A结合或作用于引物前体而抑制 D N A复制，从 而降低D N A的复制效率。E ． c o l i 的 c o l e 1 质粒复 制的前提是合成适当的R N A( R N AⅡ) ， 它自动折叠 后与 D N A模板结合形成 D N A复制的引物， 从复制起始点上游一4 4 5 b p 处开始， 以另一 D N A为模板反 向转录的RN A I正好与 RNA1 I的结合， 阻止了正 常引物的产生， 从而干扰复制的进行。 作用机制 反义 R N A的作用机制主要表现在D N A复制、 转录 和翻译 3个水平上。 二、转录水平 转录及转录后水平的作用 反义 R NA与 m RNA 5 末端互补结合， 阻断帽 子结构形成； 作用于外显子和内含子的连接区， 阻碍前 m R N A剪接； 作用于 p o l y A形成位点， 阻碍 mRN A的成熟及其向胞浆转运。在 c r p 基因的t i c R NA ( t r a n s c r i p t i o n i n h i b i t o r y c omp l e me n t a r y RNA) 负 向 自我调控中， t i c R N A与 e r p m R N A的 5 端结合， 形 成类似于R N A聚合酶识别的转录终止信号的二级 结构， 以反式作用对转录过程本身进行调控 J 三、翻译水平 翻译水平的作用 反义 R NA可直接与 m R N A的 S D序列( 含 R B S ) 或编码区( 主要是 A U G) 结合， 从空间上直接 阻止核糖体的正常结合或可直接降解靶 mR N A。 反义R N A与 m R N A在 S D序列配对形成吻触复合体或在互补区段结合形成 R N A—R N A双链结构，从而调控翻译的进行。在真核生物细胞中有许多 R N A在翻译水平上表现反义R N A的功能。如鸡胚 胎肌浆中存在的富含 U的小分子 R N A称为 t c RNA， 它们可以与肌球蛋白重链的 RN A的 p o l y A尾杂交而抑制正常的翻译过程。A u d r e y等 J 的研究表明 F GF—AS R NA在翻译过程能有效地抑制F GF一2在哺乳动物细胞中的表达。 反义 RNA的重组 DNA中只有启动子及终止子， 当转染细胞后， 重组 D N A能 自动表达反义R N A， 并且重组 D NA自身可以整合到宿主的基因组 D NA中， 或作为“ 附加体” 长期存在。在原核细胞中， 反义 R N A以针对 S D序列效果最好， 而在真核细胞中以5 端非编码区为标靶最有效。 反义RNA的应用 随着基因组草图的完成, 人们研究的重点已转向对基因功能的研究, 反义核酸技术无疑为这项宏伟的工程提供了一种有力的工具。 抗病毒作用 病毒是 对人 和动植 物危 害极大 的病原体 ,然而对病毒引起 的疾病的治疗 ,目前 尚无特效药物与方法。反义 R N A 却能特异性阻断病毒基因表达 和抑制病毒的复制 ,从而激起许多科学工作者去探索反义 R N A 治疗病毒性疾病的有效方法。抗病毒反义 R N A 技术是将特定的病毒基因反 向插人到表达险载体中,以构建反义 R N A 表达载体 ,再将重组体导人真核细胞(病毒宿主细胞)中表达特异性反义 R N A,从而抑制特异有 害基 因的表达或抑制病毒复制。文献报道 ,运用反义 R N A技术 己经成功地抑制疤病毒 、流感病毒 、人类免疫缺陷病毒 (H I V )等对培养的组织细胞的侵袭。用针对植物病 毒的反义 R N A 已培育出具有抗病毒能力 的植 物。 姚志强等针对不同靶位设计了1 0 段互补反义核酸( D NA片段) ， 经模型筛选发现针对S基因起始区、 S P 2增强子帽区和 p o l y A信号编码区的a s O Ns 作用最强，