泻火补肾汤对脑血神经干细胞移植后免疫排异中IL-2、IL-10表达的影响.pdfVIP

中文摘要 研究背景脑出血后留有不同程度的偏瘫、失语等残疾，致使病 stem 人生活质量严重下降．神经干细胞(neuralcells，Nsq的发现给 脑血管疾病的治疗带来新的希望，但由于脑出血后内源性神经干细胞 发生的数目有限，不足以修复脑出血后神经损伤，因此用外源性神经 干细胞移棱治疗脑出血有可能取得满意的效果．然而脑出血后血脑屏 障破坏，大量血液细胞侵入脑内，其中免疫细胞激活导致细胞因子释 放．这种脑内环境的改变既可促进小胶质细胞等细胞表面表达主要组 织相容性复合物(MHC)分子，促进抗原递呈及识别，也可诱导神经干 细胞MHC分子的表述，脑内原有的“免疫豁免”环境发生了改变，可 诱发免疫排斥反应，加重组织损伤． 根据免疫反应理论，脑出血血脑屏障损伤情况下，用NSo侈植治 作用于内皮细胞，选择性诱导黏附分子VCAM．1的表达，白细胞穿越 毛细血管壁，游出至脑组织引起炎症反应．血管内皮细胞无论在脑出 血的炎症反应或免疫排斥过程中，均起着关键作用． 目的本研究旨在通过观察泻火补肾汤对白介素一2(interleukin cerebralmicrovascularendothelialcells， 预大鼠脑微血管内皮细胞(ral RCMECs)qb的表达的影响，探讨泻火补肾汤在NSC移植免疫反应中 对微血管内皮细胞的保护作用及可能机制． 方法1。大鼠随机分为正常纽．假手术组，脑出血组，NSC移植 组及泻火补肾汤组，Ⅶ型胶原酶注射复制脑出血模型，术后2d进行 NSC移植，第4d，7d分两批处死，分别用Westernblot及ELlSA现察 细胞凋亡情况． 2．分离原代鼠脑微血管内皮细胞，随机分为空白组，I矾吖刺激组、 正常血清对照组、泻火补肾汤组，玎P》h干预4h后分另q用正常血清， 和蛋白表达水平，用TUNE溉察细胞凋亡情况． 结果 体内实验 1．脑出血进行侧脑室下区神经干细胞移植治疗的最佳治疗时间 是出血后第2天． 2．。在正常鼠脑中，来见矾INEl，阳性细胞．脑出血后可见较多 TUNEL阳性细胞，主要分布于出血区周围，NSC移植后4天，7天 TUNEL阳性细胞表达增加，与脑出血组比较差异显著(P0，05)；泻火 补肾汤干预后阳性细胞较NSC移植组明显减少(氏O．05)，神经干细胞 移植后各组7d较4d细胞凋亡减少． 3．1L2的检测： 血清IL-2有轻度表达，脑出血组、NSC移植组血清IL-2水平较正常 纽和假手术组明显上升，泻火补肾汤组血清IL-2水平低于脑出血组及 NSC移植纽：7天时．脑出血组．NSC移植组，泻火补肾汤血清IL．2 水平较4d表达减少，NSC移植组II．-2表达水平最高，泻火补肾汤组 血清IL-2水平低于脑出血组及NSC移植组． 组匝2有轻度表达，脑出血组、NSC移植组、泻火补肾汤组IL-2水平 较正常组和假手术组明显上升，NSC移植组表达最强，泻火补肾汤组 IL-2表达较NSC移植组减少；7天时各组表达差异比较同4天，各组 与4天比较表达减轻，但无统计学差异． 4．1LlO的检。测： 血清检测到较高水平的IL-10达；脑出血组、NSC_A蝴、泻火补肾 汤组大鼠Il，10校正常组、假手术组IL-lO考-ik达显著降低，泻火补肾汤组 较脑出血组IL-10表达增加；7天时脑出血组、Nsc移植组．泻火补肾汤 组大鼠Ⅱ，10较正常组、假手术组IL-IO达减轻，三组间没有显著性差 异． 假手术组IL-IO有轻度表达，脑出血纽、NSC移植组、泻火补肾汤纽 IL-10水平较正常组和假手术组明显上升，NSC移植纽表达最弱，泻火 补肾汤组IL-10表达NSC移植组明显增加；7天时脑出血组与NSC移 植纽、泻火补肾汤组比较已没有统计学差异．而泻火补肾汤组IL-10表 达仍明显强于NSC移植组． 体外实验： 1．IFN-Y刺激脑微血管内皮细胞模拟免疫损伤模型，确定IFN-7 刺激浓度最佳为40ng／n,a，5％泻火补’净汤血清作用4h作为最佳的干 预条件。 2．IL．2的检测： 组，正常血清组、泻火补肾汤组细胞上清11．-2较空白对照组表达增 加，泻火补肾汤干预后与IFN-y生．g，正常血清纽比较II_,-2表达减少． (2)gr-PCg