肿瘤抑制基因P6和UBAP1在慢性粒细胞白血病的表达研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 肿瘤抑制基因P16和UBAPl在慢性粒细胞白血病的 表达研究 目的 慢性粒细胞白血病(Chronicleukemia，CML)是起源于多能造血 myeloid 干细胞的恶性肿瘤性疾病，其自然病程可分为慢性期(CP)、加速期(AP)和 急变期(BC)。研究表明，80％的病人在CML．BC可见到除ph染色体外的其它 度作用促进细胞非正常繁殖，与人类多种肿瘤的发生、发展、恶化密切相关； UBAPl基因是一个新的泛肽相关蛋白家族成员。研究表明，与相应的正常组织 比较，其在癌变组织中表达不一，说明UBAPl基因可能与多种肿瘤的发生发 基因二者位于9p21～22的相邻区域，均参与细胞周期的调节过程，能够延缓细 胞由GO、G1期进入S期，从而起到调控细胞生长的作用。 因此，本课题主要研究调控细胞生长的肿瘤抑制基因P16和UBAPl在慢 性粒细胞性白血病细胞中的mRNA表达水平，并探讨二基因与疾病发展的关 系。 方法 一、选取研究对象 93例初诊CML患者骨髓标本，其中CML．CP76例，CML．AP及CML．BC 17例，其中12粒为急髓变，5粒为急淋变。非恶性血液病患者22例作为对照 组。 二、实时荧光定量PCR 收集患者骨髓单个核细胞，提取，营,RNA，按试剂盒说明书配置逆转录反应 体系合成cDNA，引物由Takara公司设计合成，采用SYBRGreenI实时定量荧 Green 光PCR方法，以GAPDH为内参照，进行SYRBIX时荧光定量PCR，检测 P16及UBAPl的表达水平。 三、结果判断 P16及UBAPl的相对表达水平。 四、统计学分析 采用SPSS16．0软件进行分析，实验结果应用秩和检验分析，P0．05为差 异有统计学意义。 结果 一、方法的可靠性和准确性 l、RNA的纯度和质量分析 所提取的总RNA经紫外分光光度计检测，比值在1．8~2．0之间，经琼脂糖 凝胶电泳鉴定，条带清晰可见，无明显降解。 2、扩增的特异性及定量的准确性 标准品cDNA经梯度稀释后进行PCR反应，制作标准曲线。得到的标准曲 线相关系数(r2)均0．998，斜率在．3-3至．3．5之间，反映定量准确，扩增效率 良好。扩增后溶解曲线显示锐利的单一锋，无其他非特异性锋，说明扩增产物 均一，无非特异扩增及引物二聚体。琼脂糖凝胶电泳进一步验证扩增片段的均 一性及长度。 二、P1 6、UBAPl基因在CML中的表达 在慢性粒细胞白血病慢性期中P16基因mRNA的表达水平与对照组比较 无显著性差异(pO．05)，在加速期和急变期中，急髓变时P16基因的表达无明 显变化，而在急淋变患者中观察到表达的明显下调(p0．05)；在慢性粒细胞白 2 血病慢性期中，UBAPl基因mRNA的表达水平与对照组比较无显著性差异 正常对照组比较有显著性差异(p0．05)。 结论 UBAPl基因与P16基因的低表达可能同时参与慢性粒细胞白血病急变的发 病，他们之间既有独立的影响，彼此之间又相互联系，使CML中某一克隆出现 恶性增殖，导致CML急变。 关键词 P16基因；UBAPl基因；肿瘤抑制基因；慢性粒细胞白血病 3 ·英文论著摘要· 0I ressorGeneP16 Ex[ f～mor-{poressc1Umor-sup 1 AssociatedProteinGeneinChronic Ubiqutin Leukemia