分子发光分析分析资料.ppt

仪器分析 * * 3、荧光猝灭 定义：荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子 的相互作用引起荧光强度降低的现象 类型 碰撞猝灭 激发单重态的荧光分子与猝灭剂分子相碰 撞,荧光分子以无辐射跃迁的方式回到基态 静态猝灭 荧光物质分子与猝灭剂分子生成非荧光 的络合物 转入三重态的猝灭 发生电子转移反应的猝灭 猝灭剂与荧光物质 荧光物质的自猝灭 浓度较高单重激发态的分子在发生荧光之前和未 激发的荧光物质分子碰撞而引起的自猝灭 溶解氧与荧光物质 * 光源 氙灯和高压汞灯 激发单色器 光栅 扫描激发光谱，选择激发波长 样品池 I0 I If 发射单色器 扫描发射光谱 消除其它光线的干扰 获得所需的荧光 检测器 显示器 与分光光度计的差别 两个单色器 两个单色器互成直角 光电倍增管 二、荧光分析仪 石英杯四 个光学面 * 三、分子荧光分析法及其应用 1. 荧光分析方法的特点 （1）灵敏度高 （2）选择性强 （3）试样量少和方法简单 （4）提供比较多的物理参数 2、荧光定量分析的方法 方法 标准曲线法 荧光强度与荧光物质浓度成正比的关系 比较法 同样条件下，测定试样溶液和一标准溶液 的荧光强度，直接通过比例计算 * 3、荧光分析法的应用 方法 直接荧光法 被测物本身有荧光 被测物与试剂反应后 F与物质的 浓度成正比 荧光猝灭法 被测物使荧光熄灭 由荧光强度降低的强度来测定被测物的含量 间接荧光法 某些阴离子夺取金属络合物中金属 离子，而释放出能发荧光的配位体 催化荧光法 反应速度慢，荧光微弱，难测定 金属离子将加速反应进行 定性和定量分析 二、定量分析 荧光强度与荧光物质浓度的关系 I0 It F 一、定性分析 F=KC 形式相同于比尔定律——一定条件下，荧光强度与荧光物质的浓度成正比 荧光强度 F正比于吸收的光量I和荧光效率? ： F∝? Ia 由朗-比尔定律： Ia = I0(1-e-? l c ) F∝? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： F= 2.3 ? I0 ? l c = Kc 定量依据： 荧光定量分析 F=KC 适用条件： ①溶液很稀，A≤0.05； ②线性范围：10-5~100ug/ml。 1. 标准(工作)曲线法： F 0 C Fx Cx 2. 比例法： 扣除空白时： * 磷光分析法 1．如何获得较强的磷光 增加试样的刚性: 低温冷冻 固体磷光法： 吸附于固相载体（滤纸） 分子缔合物的形成： 加入表面活性剂等 重原子效应： 加入含重原子的物质，如银盐等 敏化磷光： 通过能量转移产生磷光 磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级 →基态， T1 → S0跃迁； 电子由S0进入T1的可能过程：（ S0 → T1禁阻跃迁） * 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。 在有荧光发射的同时测量磷光 磷光分析仪器 应用 * 光谱分析 原子光谱 原子吸收 原子发射 原子荧光 分子光谱 分子吸收 紫外-可见光谱 红外光谱 分子发光 * 第八章 分子发光分析法 分子 吸收能量 激发为激发态 释放出能量 基态 电能 化学能 光能 称为“发光” 光的形式释放 荧光 磷光 分子发光 光致发光 化学发光 辐射跃迁 非辐射跃迁 以热的形式释放 * 分子荧光/磷光分析法 一、基本原理 （一）荧光和磷光的产生 ? 从分子结构理论来讨论 分子中电子 的能量状态 电子所处的能级 振动能级 转动能级 电子的多重态 J=2S+1 S：为各电子自旋量子 数的代数和 S=0, J=1 单重态S表示 （所有电子都是自旋配对的） S=1, J=3 三重态 T表示 大多数基态分子都处于单重态 电子在跃迁过程中伴随着 自旋方向的变化（自旋平行） * 基态单重态S 激发态单重态S 激发态三重态T 激发单重态S与激发三重态T的不同点： ⑴ S是抗磁分子(磁矩=0)，T是顺磁分子(磁矩≠0) ⑵ tS = 10-8s, tT = 10-4～1s；(发光速度很慢) ⑶ 基态单重态到激发单重态的激发为允许跃迁， 基态单重态到激发三重态的激发为禁阻跃迁； ⑷ 激发三重态的能量较激发单重态的能量低 荧光的产生 激发态分子 辐射跃迁 无辐射跃迁 荧光 磷光 猝灭 内转换 系间跨越 振动弛豫 受激发分子的去活化过程 * 其