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一、基因工程中的几个易错易混问题 1.限制性核酸内切酶使双链DNA特定部位的磷酸二酯键断开,解旋酶使双链DNA的氢键断开。 2.DNA连接酶与DNA聚合酶都能催化形成磷酸二酯键,前者催化连接DNA片段,后者催化单个的脱氧核苷酸聚合形成DNA。RNA聚合酶催化单个的核糖核苷酸聚合,形成RNA。 3.质粒并不是宿主细胞生命活动所必需的,但其可使宿主细胞具有对抗生素产生抗性、产生抗生素、降解复杂有机物等抵御外界不利因素的能力。 4.基因组文库包含了某种生物的全部基因,cDNA文库只包含某种生物的部分基因。 5.启动子位于基因的首端,它驱动基因转录出mRNA,起始密码子位于mRNA的首端,它驱动mRNA翻译成多肽链。 6.将目的基因导入植物细胞常用土壤农杆菌转化法,常导入植物体细胞,经组织培养后形成转基因植株;导入动物细胞常用显微注射法,常导入受精卵,经胚胎移植获得转基因动物;利用基因工程生产药物时,常将基因导入微生物,导入大肠杆菌常用Ca2+处理成感受态细胞再进行转化。 7.检测是否导入目的基因及目的基因是否转录出mRNA常用DNA分子杂交法,检测目的基因是否表达出蛋白质常用分子杂交法,有时基因工程还需要进行个体生物学水平鉴定。 8.DNA复制用解旋酶打开氢键获得模板链,PCR利用高温使氢键断裂得到模板链。 9.基因工程通过转基因获得异种生物的蛋白质,蛋白质工程通过基因修饰或基因合成,对蛋白质进行改造或制造出自然界没有的蛋白质。 二、细胞工程中的几个易混易错问题 1.单克隆抗体制备中的两次筛选 (1)第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及B-B融合的细胞、瘤-瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰,筛选出B-瘤融合的细胞。 (2)第二次筛选是将能产生特定抗体的B-瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。 2.克隆技术应注意的问题 (1)植物组织培养的目的不同,培养阶段也就不同:若生产人工种子,则培养到胚状体阶段;若提取细胞产品,则一般培养到愈伤组织阶段;若培育新个体,则应培养到试管苗阶段。 (2)动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养(基础)、动物细胞融合、动物细胞核移植等。 (3)动物细胞融合和植物体细胞杂交产生的后代中都含有两个亲本的遗传物质;植物组织培养和人工种子产生的后代中都只含有一个亲本的遗传物质。 (4)植物体细胞杂交后的细胞具有全能性,动物细胞融合后的杂种细胞没有全能性。 (5)动物体细胞核移植是将动物的一个体细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个胚胎最终发育为动物个体。 (6)植物体细胞杂交的终点是培育杂种植株,而不是形成杂种细胞就结束。 三、胚胎工程中易混淆的概念 1.内细胞团和滋养层细胞:在胚胎发育成桑椹胚后,桑椹胚进一步发育,细胞开始出现分化。聚集在胚胎一端的、个体较大的细胞,称为内细胞团,将来发育成胚儿的各种组织;而沿透明带内壁扩展和排列的、个体较小的细胞,称为滋养层细胞,将来发育成胎膜和胎盘。 2.核移植技术获得的动物与供核动物性状不完全相同的原因分析: (1)克隆动物的绝大部分DNA来自供体细胞核,但细胞质中线粒体的DNA来自受体卵母细胞。(2)性状是基因与环境共同作用的结果。(3)个体发育中可能发生基因突变,产生新的性状。 1.人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及治疗药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如下图所示。 (1)卵母细胞除从活体输卵管中采集外,还可从已处死的雌鼠________中获取。 (2)图中的高血压相关基因作为____________,质粒作为________,二者需用________切割后连接成重组载体,该过程与质粒上含有________________有关。 (3)子代大鼠如果________________和______________________,即可分别在分子水平和个体水平上说明高血压相关基因已成功表达,然后可用其建立高血压转基因动物模型。 (4)在上述转基因大鼠的培育过程中,所用到的主要胚胎工程技术是________、早期胚胎培养和胚胎移植。 解析:(1)对于实验动物大鼠,如果是从活体输卵管中采集的卵母细胞,可以直接与获能的精子在体外受精。如果是从已处死的雌鼠卵巢中采集的卵母细胞,需要在体外经人工培养成熟后,才能与获能的精子受精。(2)题图中的高血压相关基因作为目的基因,质粒作为载体,二者需用同种限制性核酸内切酶切割后才能连接成重组载体,该过程与质粒上有限制酶切割位点有关。(3)若在子代大鼠的体内检测出与高血压相关的蛋白质,则从分子水平上说明高血压相关基因已成功表达;若子代大鼠的血压升高,则从个体水平上说明高血压相关基因已成功表达。(4)在转基因动物的培育
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