生物技术基因敲除PBL.pptVIP

生物技术第三小组 郭灵伊 梁海萍 李博奋 李值龙 莫钦云 基因敲除技术 概述及原理 基因敲除技术的及原理及方法 基因敲除技术的应用及前景 基因敲除技术的缺陷 同源重组 真核细胞减数分裂过程中，同源染色体彼此配对，同源染色体DNA片段发生交叉与互换 同源重组（homologous recombination）发生在两个同源DNA分子之间 同源重组在接合、转导或转化后外源DNA整合到细菌基因组中 基因敲除技术的原理及方法 基因同源重组 RNAi基因敲除 利用随机插入突变进行基因敲除 利用基因打靶技术产生转基因动物的程序 ａ．ES细胞的获得：　 ｂ．基因载体的构建： ｃ．将基因打靶载体通过一定的方式(常用电穿孔法)导入 同源的胚胎干细胞(EScell)中，使外源DNA与胚胎干细胞基因组中相应部分发生同源重组，将打靶载体中的DNA序列整合到内源基因组中从而得以表达。 ｄ．用选择性培养基筛选已击中的细胞： 　　 ｅ．通过观察嵌和体小鼠的生物学形状的变化进而了解目的基因变化前后对小鼠的生物学形状的改变，达到研究目的基因的目的。 基因捕获法 基因敲除技术的应用 建立生物模型：基因敲除技术就常常用于建立某种特定基因缺失的生物模型，从而进行相关的研究。 提供廉价的异种移植器官：这是因为异源生物的基因会产生一些能引起人体强烈免疫排斥的异源分子，如果能将产生这些异源分子的基因敲除，那么动物的器官将能用于人体的疾病治疗 ③疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗 基因敲除技术的缺陷 基因敲除技术始终存在着一个难以克服的缺点，即敲掉一个基因并不一定就能获知该基因的功能，其原因包括：一方面，许多基因在功能上是冗余的， 敲掉一个在功能上冗余的基因，并不能造成容易识别的表型，因为基因家族的其他成员可以提供同样的功能；另一方面，对于某些必需基因，敲除后会造成细胞的致死性，也就无法对这些必需基因进行相应的研 * * 基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。基因敲除又称基因打靶，该技术通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳定遗传等特点 基因敲除分为完全基因敲除和条件型基因敲除。完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除细胞或者动物个体中的靶基因活性。条件基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。 随机插入突变进行基因敲除是利用某些能随机插入基因序列的病毒，细菌或其他基因载体，在目标细胞基因组中进行随机插入突变，建立一个携带随机插入突变的细胞库，然后通过相应的标记进行筛选获得相应的基因敲除细胞 RNAi是指双链RNA诱导同源mRNA降解导致基因表达抑制的现象又称基因沉默,是一种转录后基因沉默现象,是生物体在进化过程中抵御病毒感染及防御重复序列和突变引起基因组不稳定的保护机制