果糖的测定 高效液相色谱蒸发光检测器法》.docVIP

《烟草及烟草制品 麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖的测定 高效液相色谱蒸发光检测器法》 标准项目试验报告 《烟草及烟草制品 麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖的测定 高效液相色谱蒸发光检测器法》标准项目组 2012年3月 目 录 1. 综述 1 2. 实验原理 2 2.1 实验原理 2 2.2 蒸发光检测器工作原理[7] 2 3. 材料与研究方法 3 3.1 仪器及试剂 3 3.2 研究路线 3 3.3 分析方法 4 3.3.1 样品制备 4 3.3.2 标准溶液 4 3.3.2.1 标准储备液 4 3.3.2.2 标准工作溶液 4 3.3.3 液相色谱-蒸发光检测器分析条件 5 3.3.4 样品含量的测定与计算 5 3.3.5 混合标准工作溶液和样品溶液典型色谱图 6 4. 结果与讨论 7 4.1 样品量的选择 7 4.2 萃取条件优化 7 4.2.1 萃取溶剂的选择 7 4.2.2 萃取方式的选择 11 4.2.3萃取体积的选择 11 4.2.4 萃取时间的选择 12 4.3 空白和干扰试验 12 4.4 标准溶液稳定性试验 13 4.5 前处理实验条件小结 13 4.6 高效液相色谱蒸发光检测器分析方法 14 4.6.1 LC分析条件 14 4.6.1.1 色谱柱的选择 14 4.6.1.2 流动相的选择 15 4.6.1.3 流速的选择 15 4.6.1.4 柱温的选择 15 4.6.2 ELSD参数的确定 16 4.6.2.1 漂移管温度的选择 16 4.6.2.2 氮气流量的选择 16 4.6.2.3 增益的选择 17 4.7 方法评价 18 4.7.1 标准曲线线性、检出限和定量限 18 4.7.2 重复性试验 18 4.7.3 回收率试验 21 4.7.4 与行业推荐标准方法的比对 22 4.7.5 再现性试验（不同地区实验室间的比较） 23 5. 检测实例 24 参考文献 27 《烟草及烟草制品 麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖的测定 高效液相色谱蒸发光检测器法》烟草中的水溶性糖与烟草的吃味、香味特征和焦油生成量关系密切，测定其对配方设计、工艺生产、烟草品质控制及卷烟降焦减害具有十分重要的意义。是烟草中重要的水溶性糖在酸性条件可水解为2分子的，是重要的烟草二糖。 对于糖的测定方法，早期主要采用纸色谱法、薄层色谱法、化学法、比色法、酶法、碘量法等经典方法进行混合糖的分析，这些方法分辨率低、分析时间长、定量困难、难以实现自动化操作。我国烟草行业中常用的方法有芒森?.沃克法、连续流动分析法和近红外（NR）光谱法，这方法均是葡萄糖量计算烟草中水溶性糖的总量（或还原糖的百分含量）。 气相色谱也可用于糖的测定，但由于其需要衍生化操作，步骤繁琐、耗时，现在测定很少采用气相色谱法。 对的直接测定法目前主要有高效液相色谱法、离子色谱法和高效液相色谱-质谱联用法，这三种方法都无需进行柱前衍生化操作。HPLC-MS分析糖类物质灵敏度高、分析速度快，非常适合痕量分析。由于烟草和烟草制品中的含量较高，无需使用高灵敏度的HPLC-MS法。离子色谱也较多的应用糖的测定，也可以达到较低的检测限，适用于对微量糖类物质的测定。由于其灵敏度较高，检测前需对样品进行较大倍数的稀释，且分析时间长，平均测试一个样品需要1小时，甚至更长的时间，不利于检测效率的提高，所以高效液相色谱法是目前采用较多的糖的方法[1~6]。 高效液相色谱法测定水溶性糖，目前使用较多的检测器是示差折光检测器示差检测易受溶剂前沿峰的干扰使分析复杂化，对温度敏感，导致基线不稳定。蒸发光检测器是上世纪八十年代发展起来的新型通用型检测器，响应不依赖于样品的光学特性，不受其官能团的影响，挥发性低于流动相的样品均能被检测，获得稳定的基线，使分辨率更好 [7]。 所以项目组在充分查阅国内外相关资料和大量的试验的基础上，欲建立高效液相色谱蒸发光检测器（HPLC- ELSD）方法，以期使高效液相法测糖的准确性更好，检测效率更高。原理 烟草及烟草制品样品用0.0mol/L氢氧化钠溶液萃取后，采用蒸发光检测器的高效液相色谱测定样品的，外标法定量 蒸发光检测原理[7]检测原理(Principle Of Operation) 蒸发光散射检测器的独特检测原理包括以下三个步骤：首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。 雾化(Nebulization) 蒸发(Evaporation) 检测(Detection) 1 雾化(Nebulization) ：经HPLC 分离的柱洗脱液进入雾化器，在此与稳定的雾化气体（一般为氮气）混合形成气溶胶。气溶胶由均匀分布的液滴组成，液滴大小取决于分析中采用的气