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重油微生物降解产物的 雌激素活性研究 汇报时间: 汇报人: 课程教师: 选题介绍 第 * / 40 页 第 * / 40 页 第 * / 40 页 第 * / 40 页 第 2 / 25 页 目录 1.引言 2.材料及方法 3.实验 结果 4.结论 重油微生物 降解产物的 雌激素活性研究 第 * / 40 页 第 * / 40 页 第 3 / 25 页 引言 1 第 4 / 25 页 引言 研究的思路与方法 石油污染 微生物修复 微生物修复具有成本费用低、效果好、对环境污染小、无二次污染，不破坏环境等优点，受到越来越多研究者的青睐。 问题的提出 第 5 / 25 页 研究的思路与方法 问题的提出 降解产物对生物和环境造成的影响 雌激素 活性 降解 产物 引言 对 生态系统 的影响 对环境的威胁 第 6 / 25 页 研究的思路与方法 研究思路 寡核苷酸DNA微阵列 细胞增殖 降解产物 的雌激素活性 研究方法 引言 问题的提出 第 7 / 25 页 2 材料及方法 第 8 / 25 页 乳腺癌MCF-7 细胞 细胞培养 C-重油的降解及监测方法 C-重油成分 分析 细胞增殖实验 DNA微阵列分析 材料 及方法 含 FBS 10％ 的 RPMI 1640 培养基 （Life Technologies，Grand Island，NY） 37°C、CO2 5%的湿润空气 第 9 / 25 页 C-重油的降解及监测方法 C-重油成分 分析 细胞增殖实验 DNA微阵列分析 细胞培养 单一菌株 Cycloclasticus sp.菌株，HP-7； 2003.8 取样于东京湾的平成海口采集的表层海水， 于含联苯的NSW培养基中培养分离得到； 复杂微生物群，TK09W； 1. 2. 3. 降解菌的选育 降解过程的监测 BioDoc-It/GDS-7900 （UVP, Upland, CA） 采用未加微生物培养的石油作为计算标准 降解过程 图像监测 量化计算 2009.1 取样于东京湾中央的表层海水， 于含重油（取自中石油）、NH4NO3（0.1%）、NaH2PO4（0.002%）、FeC6H5O7（0.002%）的培养基中培养； 4. 材料 及方法 第 10 / 25 页 细胞培养 C-重油的降解及监测方法 C-重油成分 分析 细胞增殖实验 DNA微阵列分析 薄层色谱法和帧电离检测 （TLC-FID）联合技术 测定C重油初始组成 11月 10月 项目2 12月 项目1 材料 及方法 第 11 / 25 页 培养 乳腺癌 MCF-7 细胞于含 DCC-FBS10 cm 厚的培养皿中； 在密度为 3×103 的 96 孔板对细胞进行接种； 再在含 DCC-FBS 培养基中至少培养 1 天； 将 E2 溶解于 DMSO 用于制备 10 mM 的 E2 原液； 接着用 10 nM E2 处理细胞； 再用 10% DMSO 处理培养皿中的控制细胞； 细胞增殖检验。 材料 及方法 细胞培养 C-重油的降解及监测方法 C-重油成分 分析 细胞增殖实验 DNA微阵列分析 第 12 / 25 页 寡核苷酸DNA微阵列（寡聚-DNA）： 指通过机械作用在载玻片上 制作203个基因的寡聚-DNA位点 （包括一组含172个雌激素反应性基因） 材料 及方法 细胞培养 C-重油的降解及监测方法 C-重油成分 分析 DNA微阵列分析 细胞增殖实验 第 13 / 25 页 3 实验结果 第 14 / 25 页 1 使用C-重油评价 微生物降解活性 第 15 / 25 页 图1.A C-重油成分分析图 23% 57% 9% 11% 图1.B C-重油微生物降解反射光图像 图1.C C-重油 量化反射光线图像 图1.B C-重油微生物降解反射光图像 2 石油降解产物 对细胞增殖的影响 第 16 / 25 页 图2 石油微生物降解产物对细胞增殖影响图 TK09W 28d TK09W 73d TK09W 101d HP-7 73d without microbes 73d 3.1 DNA微阵列技术用于 基因表达分析 第 17 / 25 页 DNA微阵列技术用于 基因表达分析 第 18 / 25 页 3.2 DNA微阵列技术用于 基因表达分析 第 19 / 25 页 3.3 DNA微阵列技术用于 基因表达分析 第 20 / 25 页 3.4 4 结论 第 21 / 25 页 原油、澄清油浆中 未发现雌激素活性 PAHs、重油特征组分 被检测出