微生物必修复习讲解.ppt

* （1）目的基因的取得 从适当的供体生物包括微生物、动物或植物中提取。 通过逆转录酶的作用，由mRNA合成cDNA。 由化学合成方法合成有特定功能的目的基因。 * （2）优良载体的选择 一个相对分子质量较小、结构清楚、具有自我复制能力的复制子。 能在受体细胞内大量扩散。 载体上最好只有一个限制性核酸内切酶的切口，使目的基因能固定地整合到载体DNA的一定位置上。 其上必须有一种选择性遗传标记，以便及时高效地选择出“工程菌”或“工程细胞”。 * （3）目的基因与载体DNA的体外重组 在外加连接酶作用下，目的基因就与载体DNA进行共价结合，形成一个完整的、有复制能力的环状重组载体或嵌合体。 （4）重组载体导入受体细胞 体外完成DNA重组后，将重组的DNA分子导入受体细胞。受体细胞要求繁殖力极强，生长速度极快，短时间内基因大量拷贝，常用的有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌和动植物细胞。 * （5）目的基因筛选和检测 确认细胞中已经摄入重组的DNA分子，检测方法有遗传学方法、原位杂交法、免疫学方法。 （6）工程菌大规模培养 体外完成DNA重组后，将重组的DNA分子导入受体细胞。受体细胞要求繁殖力极强，生长速度极快，短时间内基因大量拷贝，常用的有大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌和动植物细胞。 * 二、基因工程的应用 1、PCR技术 PCR（polymerase chain peaction）称DNA多聚酶链式反应。于1985年由美国Millus创立。PCR是DNA在体外扩增的技术，广泛应用于法医鉴定、医学、卫生检疫、环境监测等方面。其检测速度快，只需5~6h就可出结果。 环境中存在各种生物的DNA，在环境中采集到少量DNA，加入引物和DNA多聚酶，经过变性和复性的过程，就可在体外扩增至足以供检测、鉴定用的量。 * PCR技术的操作步骤： 1、加热变性：将待扩增的DNA置于94~95℃的高温水浴中加热5min，使双链DNA解链为单链，作为扩增的模板。 2、退火：将加热变性的单链DNA溶液的温度缓慢下降至55 ℃左右，在这过程中将引物DNA碱基与单链模板DNA一端碱基互补配对。 3、延伸：在退火过程中，当温度下降至72 ℃时，在耐热性Taq DNA多聚酶、适当的pH和一定的离子强度下，寡核苷酸引物碱基和模板DNA结合延伸成双链DNA。 * 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡； 第五节 菌种的退化、保藏 一、菌种的衰退与复壮 菌种衰退是指某纯种微生物群体中个别个体发生自发突变的结果，使该物种原有生物学性状发生衰退性的量变或质变的现象。 菌种出现或表现出负变性状 * 1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有 原有典型性状的菌种。 2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种 维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮： 使菌株复壮的方法： 1、纯种分离；2、通过宿主体内复壮；3、淘汰已衰退个体 * 二、防止衰退的措施 1）减少传代次数； 2）创造良好的培养条件； 3）利用不易衰退的细胞传代； 4）采用有效的菌种保藏方法； * 掌握的知识点： 微生物主要遗传物质DNA的结构和复制过程 微生物变异的原因和变异的种类 RNA存在形态和功能 微生物遗传和变异的现象及意义 DNA变性和复性过程及应用 生物遗传信息传递过程 生物遗传密码的基本特征和蛋白质合成过程 基因重组 基因工程的基本原理及应用 菌种衰退和复壮的基本概念和方法 微生物的生态 是研究生物系统的结构与其所处环境条件之间的相互作用规律性的科学 它从生物个体、种群、群落、生态系统以及生物圈等多个层次上来研究生物与环境相互作用的过程和规律。　　　　　　　　 ecology 个体 种群 群落+非生物环境 生态系统 生物圈 Community：同一环境内居住的两个以上生物种群的集合。 Ecosystems：一个特定环境内由生物和它们的生活环境组成的一个整体。 Biosphere：地球上所有生物及其所生活环境的总称；最大的生态系统 Population：生活在同一环境中的同种个体组成的能繁殖集团。 生态平衡：在一定时间内生态系统中的微生物与环境条件之间、生物种群之间，通过能量、物质、信息等联系而达到高度适应、协调和统一，并保持相对稳定的状态，且能对外来干扰进行自我调节。 微生物生态学—研究和揭示微生物系统与环境系统之间的相互作用及其功能表达规律。 主要研究微生物在自然界中的分布、种群组成、数量和生理生化特征；研究微生物之间及其与环境之间的关系和功能。 一、 土壤中的微生物 土壤是固体无机