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单林娜 制作 第十一章 DNA 重组与转座 本章内容 11.1 DAN的重组 11.2 DNA的转座 11.1 DNA重组 11.1.1 DNA重组的概念和意义 11.1.2 同源重组——Holliday模型 11.1.3 DNA重组有关的酶 11.1.4 位点特异性重组 11.1.5 细菌的基因转移与重组 11.1.1 DNA重组概述 1、概念： 是指由于不同DNA链的断裂和连接而产生的DNA片段的交换和重新组合，形成新的DNA分子的过程。 DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合，称为遗传重组 。 2、DNA重组的意义 重组的生物学意义： 它能迅速增加群体的遗传多样性(diversity); 使有利突变和不利突变分开(separation); 通过优化组合积累有意义的遗传信息 为DNA损伤或复制障碍提供修复机制 某些生物的基因表达受DNA重组的调节 重组的科学意义：重组是遗传学的灵魂，没有重组就没有生物的进化；是现代分子克隆技术的核心。 3、DNA重组的类型 11.1.2 同源重组——Holliday模型 同源重组的最初证据来自细胞遗传学对减数分裂时染色体行为的研究。真核生物在形成配子时，细胞染色体进行一次复制，细胞核进行两次分裂，由此从双倍体细胞产生单倍体细胞，称为减数分裂（meiosis）。 在减数分裂的前期，参与联会(synapsis)的同源染色体实际上已复制形成两条姊妹染色单体，从而出现由四条染色单体构成的四联体（tetrad）。在四联体的某些位置，非姊妹染色单体之间可以发生交换（crossing over）。光学显微镜可看到联会复合体中存在染色体交叉（chiasma）现象。 现在认为，同源重组是减数分裂时同源染色体联会的原因，而不是联会的结果。 染色体配对时形成的联会复合体结构电镜照片 DNA 同源序列间发生的重组叫非特异性(Generalized)或同源(Homologous recombination)重组。它是由两条同源区的DNA分子，通过配对、链的断裂和再连接，而产生片段交换(crossing over)的过程 。 在真核生物中，重组发生在减数分裂时期，在雄性中发生在精子发生期，雌性发生在卵子发生期。这时候是减数分裂的“四链期”，四条链中只有两条参与重组 。 同源重组的Holliday模型 1964年由Holliday提出。很好地解释了高等的真核的重组和真菌中发现的基因转变的现象。 近代Potter.H和Dressler,D.在噬菌体中的拍摄到Hollidy结构的电镜照片，为Holliday模型提供了一个有力的证据。 大肠杆菌质粒重组中电镜下观察到的Holliday结构 断裂和重连产生异源双链DNA 1. 同源序列排列在一起； 2. 酶切。通过核酸酶和RecBCD蛋白复合体的作用在一对同源DNA上产生切口； 3.入侵。含有3’端切口的ssDNA被recA蛋白包裹形成recA蛋白-ssDNA细丝；RecA-ssDNA 细丝寻找相对的DNA双螺旋上的相应序列。 4. 游离端交叉连接，形成Holliday 结构； 5.通过分支迁移产生异源双链DNA； 6. 空间重排。十字型两臂旋转180度； 7. Holliday中间体解离(两种不同方式)； 8. 修复连接，形成两个双链重组体DNA。 11.1.3 与DNA重组有关的酶 在遗传重组过程中，尤其在同源重组中需要recA蛋白和recBCD蛋白。 recA蛋白由E.coli自身编码，此蛋白有353个氨基酸组成，分子量38000 Da。 （一）RecA 1、作用：可促进单链同化或单链吸收 RecA具有使DNA单链置换双链中同源链的能力 特异地识别单链DNA，并能将之与同源DNA中的互补顺序“退火”，同时将另一条链排挤出去（取代），形成杂种分子。 2、单链同化发生的三个条件 （1）其中一个DNA必须存在单链区 （2）其中一个DNA必须有一个自由3’末端 （3）此单链区和3’末端必须位于两分子之间互补的区域内 任何部位的ssDNA都可以借助RecA与同源dsDNA进行链的交换 （二）RecBCD复合体 1、酶的活性： （1）核酸外切酶 （2）核酸内切酶 （3）解旋酶 2、作用： 在Chi位点处产生含3ˊ游离未端单链 Chi位点---RecBCD识别的靶位点 5 GCTGGTGG 3 3 CGACCACC 5 是重组频率较高的部位，E.coli中每隔约5~11 kb有一个拷贝。 11.1.4 位点特异性重组 （site-specific recombination