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重组腺病毒表达载体介导艾滋病毒vif蛋白调控kshv潜伏感染的初探
第 卷第 期 南京医科大学学报（ 自然科学版）
31 1
年 月 （ ）
2011 1 ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING Natural Science ·13 ·
重组腺病毒表达载体介导艾滋病毒Vif 蛋白调控KSHV 潜伏感染的初探
1 1 * 1
贾雪梅，王 平 ，秦 娣 ，卢 春
1
（ 南京医科大学第一附属医院妇产科，江苏 南京 210029 ； 南京医科大学微生物学与免疫学系，江苏 南京 210029 ）
［摘 要］ 目的：利用 腺病毒载体系统包装含人类免疫缺陷病毒 型（艾滋病毒： ）病毒体感染性因子（ ）的重
AdEasy 1 HIV-1 Vif
组腺病毒， 使之感染原发性渗出性淋巴瘤细胞系 细胞， 并检测 蛋白对细胞中卡波济肉瘤相关疱疹病毒 （
BCBL-1 Vif Kaposi′s
sarcomaassociated herpesvirus ，KSHV ）潜伏感染与裂解性复制的影响。 方法：从实验室先前构建的重组真核表达质粒pCI-neo-Vif
中扩增出 基因，插入到腺病毒穿梭质粒 中构建成 ，酶切线性化的重组穿梭质粒与腺病毒骨架
Vif pAdTrack-CMV pAdTrack-Vif
质粒pAdEasy-1 共同转化感受态BJ5183 细胞构建成重组腺病毒质粒。 重组腺病毒在AD293 细胞中得到包装和扩增。 用荧光计
数法测定腺病毒滴度，以感染复数（ ）为 的病毒量感染靶细胞 ，荧光显微镜观察靶细胞中绿色荧光蛋白（ ）的表
MOI 1 BCBL-1 GFP
达，并利用逆转录 （ ）和免疫印记（ ）技术分别检测 基因在靶细胞中的转录和表达情况，而且采用实时荧
PCR RT-PCR Western blot Vif
光定量 （ ）和 分别检测 裂解期基因 转录及裂解期蛋白 的表达。 结果：经
PCR Real-time PCR Western blot KSHV ORF26 mRNA vIL-6
酶
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