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克隆载体
第三章 基因工程载体 §1 概述 §2 克隆载体 §3 大肠杆菌表达载体 §4 目的基因与载体的连接 第一节 概述 载体（vector）是指将外源DNA或基因携带进入宿主细胞进行扩增或表达的工具。 按工作方式:质粒载体、噬菌体载体、粘粒载体、人工染色体载体等。 按功能:克隆载体和表达载体，表达载体又分胞内表达和分泌表达载体。 按受体细胞:原核细胞载体和真核细胞载体。 载体的功能 运送外源基因高效转入受体细胞。 为外源基因提供复制能力或整合能力。 为外源基因的扩增或表达提供必要的条件。 第二节 克隆载体 克隆载体(cloning vector)：是指用于扩增或保存外源DNA片段而设计的载体。 克隆载体的结构特征 克隆载体具备的条件 ①载体都能携带外源DNA片段(基因)进入受体细胞，或停留在细胞质中自我复制，或整合到染色体DNA上，随着染色体DNA的复制而同步复制。（复制原点） ②载体都具有供外源基因插入的限制性核酸内切酶位点，即多克隆位点。 ③载体都具有合适的遗传标记基因。 ④载体都必须是安全的，不应含有对受体细胞有害的基因，并且不会任意转入除受体细胞以外的其他生物细胞，尤其是人的细胞。 ⑤载体本身的分子量都比较小，可容纳较大的外源基因片段。 ⑥载体在细胞内的拷贝数要高，方便外源基因在细胞内大量扩增。 ⑦载体在细胞内稳定性要高，保证重组体稳定传代而不易丢失。 ⑧载体的特征都是充分掌握的，包括它的全部核苷酸序列。 * * 多克隆位点(multiple cloning site) ori 复制起始点 遗传标记 pUC MCS Ampr
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