毛细管电泳技术及其在药物分析中的应用.doc

毛细管电泳及其在药物分析中的应用年级专业学号姓名毛细管电泳及其在药物分析中的应用[论文摘要]electrophoresis,CE）是近年来发展迅速的一种新型分析技术,具有高效、快速、分离模式多、应用范围广等特点。 [关键词]毛细管电泳（capillary electrophoresis，CE）。毛细管电泳实际上包含电泳、色谱及其交叉内容，它使分析化学得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析，乃至单分子分析成为可能。 本文介绍了毛细管电泳法的发展和工作原理及在药物分析中的应用。包括药物分析的三大部分：一是原药的定量，原药中杂质的测定、药剂的分析以及对它们的稳定性的评价等以药品质量管理为目的的测试方法。这些方法要求有良好的选择性，适当的分析灵敏度和可靠的准确度等。二是对进入人体内的药物或代谢物的吸收、分布、代谢、排泄等体内动态的研究，即临床药物分析。三是手性药物的分离分析。 2 毛细管电泳技术 2.1 毛细管电泳的发展历史及发展方向 2.1.1 毛细管电泳的发展历史 1937年，诺贝尔奖获得者、瑞典化学家AmeTiselius教授利用电泳现象发明了最早期的界面电泳，用于蛋白质分离的研究，从而开创了电泳技术的新纪元，1967年Hjerten最先提出在直径为3mm内径的毛细管中做自由溶液的区带电泳 (capillary zone electrophoresis，CZE)，但他没有完全克服传统电泳的弊端。现在所说的毛细管电泳技术(CE)是由Jorgenson和Luckacs在1981年首先提出，他们使用了75μm内径的毛细管柱，用荧光检测器对多种组分实现了分离。l983年后，Hjerten等先后提出了毛细管凝胶电泳(capillary gel eleetrop horesis，CGE)和毛细管等电聚焦法(capillary isoelcetr icfocu sing，CIEF)。 1984年Terabe将胶束引入毛细管电泳，开创了毛细管电泳的重要分支： 胶束电动毛细管色谱 (micellar electrokinetic capillary chromatography，MECC或MEKC)。[1]近年来，将液相色谱的固定相引入毛细管电泳中，又发展了毛细管电色谱 (capillary electrochromatography，CEC)，扩大了电泳的应用范围。美国加州大学伯克利分校的Richard A.M.教授更于20世纪90年代开始发展芯片电泳方法，发展出了世界上独具特色的碟形高密度集成毛细管电泳芯片，大大提高DNA分子的测序速度，一度成为DNA分子测序领域的主流技术，为人类基因组测序工程提前完成做出过重要贡献。在上个世纪的最后几年里，世界范围内的广泛研究，促成了一个研究分支—芯片毛细管电泳，即第一代微流控芯片的出现。今天，科学家们可以在芯片上对生命物质如基因、蛋白质和细胞等进行分离和分析。例如，Richard A.M.等正在开发用于探测火星氨基酸和可能微生物的新集成方法。 CE是一种迅速发展的分离技术，其最大优点之一是应用范围广泛。它能用于分离多种化合物，如氨基酸、手性药物、维生素、杀虫剂、无机离子、有机酸、染料、表面活性剂、肤和蛋白质、糖类、低聚核苷酸和DNA限制性内切片段甚至整个细胞和病毒颗粒。 2.1.2 毛细管电泳的发展方向 目前，毛细管电泳的发展方向有两个大方面。第一是毛细管电泳的应用研究,主要集中在蛋白质分离、DNA测序、手性分离、糖分析等。第二是毛细管电泳方法本身的完善和发展,这里以建立新的分离模式和联用技术为重点。现在对应用研究方面作一简单介绍。 (1)蛋白质分离 蛋白质是生物体内的一类重要活性物质,对生命过程起着重要的调节作用,是生命现象和分子生物学研究的最基本和最重要的对象之一。毛细管电泳是分离蛋白质的有效手段。但在分析方面也面临两个主要问题。一是蛋白——蛋白相互作用。二是吸附。 在任何蛋白质的输运过程中都要考虑蛋白质之间的相互作用。毛细管电泳也是如此。这种相互作用包括结合和解离,同一蛋白质的集聚,不同蛋白质或蛋白质与其它大分子(如脂、寡核苷酸等)之间的结合或集聚,以及其它键合作用。无论是对毛细管电泳的实验设计或是对分析结果的解释,都必须考虑蛋白质的这种相互作用。 第二个问题是吸附。吸附过程至少与三个因素有关,一是硅胶毛细管表面(包括净电荷、离子强度、电荷密度等)；二是蛋白质的物理性质(如等电点、稳定性、电荷分布等)；三是样品与缓冲液体系的性质(如离子强度、缓冲液类型、盐的性质等)。其中最主要的是要考虑净电荷和被分析物质的性质对吸附的影响。吸附不仅降低柱效,而且影响峰形，使分辨率下降甚至不出峰。为解决这一问题,人们采用极端pH值、添加剂、涂层柱以及径向电场调制等方法。 (2)DNA测序 核酸是4种核