β—胡萝卜素和番茄红素提取分离测定.docVIP

β—胡萝卜素和番茄红素提取分离与测定 一、实验目的 学习从天然产物中提取有机化合物的方法。学习用薄层层析法检验有机化合物的基本原理，点样，展开和计算Rf值的方法。 1：9 丙酮一石油醚（bp60－90℃）混液作洗脱剂进行洗脱，控制流出速度如前（这混液洗脱剂有助于混合物中极性较大的组分移动），又可分出两个黄色组分。在45—90min 内，柱中物料将全部洗脱出来。观察这些物料通过柱子的移动情况。在三角烧瓶中收集3 份洗出液。用纸色谱、薄层色谱对各段洗出液进行色谱分析。 3.薄层色谱法 样品：柱色谱法中洗脱出的份样品液 展开剂：1：9 丙酮一石油醚溶液 薄层板的制备：取3 片载波体，洗净，晾干。 在50ml 烧杯中放置3g 硅胶G，逐渐加入0.5%cmC 水溶液8ml，调成均匀的糊状，将此糊状物倾于上述洁净的载玻片圣桑，用手将带浆的载玻片在水平的桌面上做上下轻微的颤动，并不时转动方向，制成厚薄均匀，表面光洁的平整的薄层板，然后放在水平桌面上，在室温放置晾干后放入烘箱中，缓慢升温至110℃，恒温0.5h，取出，稍冷后置干燥器中备用。 点样：取出上述制好的薄层板，分别在距一端点1cm 处用铅笔轻轻划一横线作为起始线。用毛细管吸取少量样品液，在一块板的起点线上点第一个色带的样品液，根据柱色谱分离的色带，依次点样，如果样点颜色较浅，可重复点样，重复点样前必须待前次样点挥干后进行。样点直径不超过2mm。 展开：待样点干燥后，小心地放入已加入展开剂的250ml 广口瓶中进行展开。在瓶的内壁贴一张高5cm，环绕周长4/5 的滤纸，下面浸入展开剂中，以使容器内被展开剂蒸气饱和。点样一端浸入展开剂0.5cm（样点不浸泡在展开剂中）。盖好瓶塞，观察展开剂前沿上升离板的上端1cm 处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，晾干后，量出展开剂和样点移动的距离，计算Rf 值。 四、注意事项 1，本实验采取的工艺不同于其他工艺，体现在原料粉碎时加入了稳定剂（5ml 氨水和35ml 乙醇）来防止β－胡萝卜素被氧化，由此可提高提取率。 2、色谱柱填装紧密与否，对分离效果很有影响。若柱中留有气泡或各部分松紧不匀（更不能有断层或暗沟）时，会影响渗滤速度和显色的均匀。但如果填装时过分敲击，又会因太紧密而流速太慢。 3、加入砂子的目的是。在加料是不致把吸附剂冲起，影响分离效果。 4、为了保持色谱柱的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶液或溶液中是必要的。否则当柱中溶液流干时。柱身干裂，影响渗滤和显色的均一性。 5、若不用滴液漏斗，也可用每次倒入10ml 洗脱剂的方法进行洗脱 6、载玻片上涂层要均匀，既不应有纹路、带团粒，也不应有能看到玻璃的薄涂料点。 7、点样用的毛细管必须专用，不得弄混。 8、点样时，使毛细管液面刚好接触到薄层（滤纸）既可，均匀点样过重而使薄层破坏。 从番茄中提取番茄红素和β－胡萝卜素 掌握色素提取方法、柱层析分离方法及薄层色谱初步定性方法。了解β－胡萝卜素与番茄红素性质的差别。 2．方法原理 番茄中含有番茄红素和少量的β－胡萝卜素，二者均属于类胡萝卜素。类胡萝卜素为多烯类色素，不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂。本实验先用乙醇将番茄中的水脱去，再用二氯甲烷萃取类胡萝卜素。因为二氯甲烷与水不混溶，故只有除去水分后才能有效地从组织中萃取出类胡萝卜素。根据番茄红素与β－胡萝卜素极性的差别，用柱层析可以将它们分离。分离效果可以用薄层层析进行检验。 3．主要实验仪器及材料 新鲜番茄（或番茄酱）。95％乙醇，二氯甲烷，石油醚（60℃～90℃），氯仿，中性或酸性氧化铝（柱层析用），环己烷，硅胶G，饱和氯化钠溶液，无水硫酸钠。 4．掌握要点 层析柱装填与操作方法，薄层点样与展开方法。 5．实验内容 1）原料处理与色素提取 称取新鲜番茄浆20 g于100 mL圆底烧瓶中，加95％乙醇40 mL，摇匀，装上回流冷凝管，在水浴上加热回流5min，趁热稠滤，只将溶液倾出，残渣留在瓶内，加入30 mL二氯甲烷，水浴上加热回流5 min，冷却，将上层溶液倾出抽滤，固体仍保留在烧瓶内，再加10 mL二氯甲烷重复萃取一次。合并乙醇和2次二氯甲烷提取液，倒入分液漏斗中，加5 mL饱和氯化钠溶液（有利分层），振摇，静止分层。分出橙黄色有机相，使其流经一个在颈部塞有疏松棉花且在棉花上铺一层1 cm厚的无水硫酸钠的三角漏斗，以除去微量水分。将此溶液贮存于干燥的有塞子的锥形瓶中。层析之前，将此溶液在通风橱中用热水浴蒸发至干。 2）柱层析分离 取一只长15 cm左右内径为1～1.2 cm的层析柱，柱内装有用石油醚调制的氧化铝。将粗制的类胡萝卜素溶解在4 mL苯中，用滴管在氧化铝表面附近沿柱壁缓缓加入柱中（留1～滴供以后的薄层层析用），打开活塞，至有色物料在柱顶刚流干时即关闭活塞。用滴管取几毫升石油醚，