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- 2016-04-05 发布于江苏
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生物工程综合大实验
木聚糖是存在于植物细胞壁中最丰富的半纤维素,其化学结构较纤维素复杂得多,它是一个以β-1,4-糖苷键相连的木聚糖主链上带着一些不同的取代基如乙酰基、阿拉伯糖基、4-O-甲基葡萄糖醛酸和阿魏酸残基等而构成的。Endo-β-1,4-木聚糖内切酶EC 3.2.1.8)简称木聚糖酶,是木聚糖降解过程中最关键的一个酶,也是被研究最多的一个半纤维素酶,随机水解木聚糖主干链内部的β-1,4-糖苷键,产生木寡糖、木二糖和少量木糖。在造纸工业饲料工业食品工业低聚木糖木聚糖酶活性的测定是以0.5%燕麦木聚糖为底物,利用对羟基苯甲酸酰肼与水解反应产生的还原糖nm的光吸收值的大小计算酶活。
用分光光度法测定木聚糖水解产物还原糖的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出还原糖的含量,最后根据产物的含量就可以计算出酶的活性。因此,制作标准曲线是酶活性测定的一项基本技术。
Bradford法是基于考马斯亮蓝G-250有红、蓝两种不同颜色的形式,在一定浓度的乙醇和酸性条件下,可配成淡红色的溶液,当与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速稳定,反应化合物在465~595nm有最大的吸光值,化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白质的含量。
同样,测定某一种蛋白质的浓度时,也要先用已知浓度的一种蛋白质制作标准曲线,然后根据标准曲线查出待测蛋白质
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