2014-10-17移液器的使用、校准和日常维护(余莹)解读.ppt

移液器的使用、校准和日常维护 报告人：余莹 注意事项 快速校准 使用方法 基本知识 相关文献 基本知识 体积调节旋钮 吸头脱卸按钮 容量显示窗 套筒 吸液嘴 量程显示窗 移液器的工作原理： 活塞通过弹簧的伸缩运动 来实现吸液与放液。 在活塞推动下， 排出部分空气， 利用大气压吸取液体， 再由活塞推动空气排出液体。 使用方法 一、如何选择移液器? 标称容量：在给定的有效量程范围内最大的容量。 例如：有一个可调式移液器，其有效量程是10μl-100μl，但实际上我们都知道，其最小值可调节到7μl左右，最大值可调节到110μl左右，那么这个移液器的标称容量是多少呢？ 范围7μl-110μl，并不是厂家所宣称的量程， 也不是该加样枪的有效量程。 此外，我们在加样时应选择与我们所需微升数相差较近量程的移液器。 适用于与水性质相同的液体和加样量比较大的液体 使用方法 二、加样方式 正向吸液：吸液时，将移液器按钮按到第一档吸液，释放按钮。放液时，先按到第一档，打出大部分液体，再按下第二档， 将余液排出。 二、加样方式 反向吸液：吸液时将按钮直接按到第二档再释放，这样会多吸入一些液体，打出液体时只要按到第一档即可。此时，吸头内部还有多余液体，可以补偿吸头内部的表面吸附。 适用于粘稠液体和易挥发液体 使用方法 无论是哪种吸液方式都要求做到快吸慢打 使用方法 三、设定容量值 粗调：通过调节旋钮将容量值迅速调整至接近自己的预想值； 细调：当容量值接近设定值以后，应将加样枪刻度显示窗平行放至自己的眼前，通过调节旋钮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响； 设定容量值时的注意事项：在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，旋转旋钮即可； 但如果要从小体积调为大体积时，则应先旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。 使用方法 四、装配吸液嘴 把套筒顶端插入吸液嘴，在轻轻用力下压的同时，把手中的移液器按逆时针方向旋转至吸液嘴卡紧。切记勿用力过猛，更不能采取跺吸头的方法来进行安装。 吸液嘴卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈； 预洗吸液嘴：在安装了新的吸液嘴或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，确保移液工作的精度和准度。 使用方法 五、吸液、移液和放液 先将四指并拢握住移液器上部，用拇指按住塞杆顶端的按钮，向下按到第一档，再将吸头垂直浸入液面2~3mm，缓慢平稳松开按钮，吸上液体，并停留1～2秒钟。 缓慢抬起移液器取出吸液嘴，确保吸液嘴外壁无残留液体。可用定性滤纸抹去吸嘴外面可能黏附的液滴。小心勿触及吸液嘴口； 将吸液嘴贴到容器内壁并保持20°-40°倾斜，平稳地把按钮压到第一停点，停1-2s（粘性大的液体要加长停留时间）后，继续按压到第二停点，排出残余液体。松开按钮，然后将吸液嘴沿着内壁向上移开； 目前我们实验室基本都是采用正向吸液的方式。 注意事项 1 正确填充吸头 当某一吸头的建议（标称）范围为最大吸头容量（标称容量）的 10% 至 100% 时，可在 35% 至 100% 这一较小以及优化的范围内实现最高精确度。在此范围内移液会减少对操作人员技法的要求，并可将结果准确度提高。当达到标称容量的 50% 时可提供最佳结果。 2 吸液时保持垂直入液角 使入液角尽可能地接近垂直位置，否则垂直液柱较小，这样将会吸入过多样品。 分液时，吸头应当与容器壁保持较小角度，从而确保良好的排液效果。 3分液技法 对于大多数应用而言，建议在分液时将吸头的末端贴靠容器壁。这可减少或者消除分液后残留在吸头上的样品。沿侧壁向上滑动吸头末端将移液器撤下，从而去除吸头孔处的任何残留液滴。 注意事项 4 吸头入液深度 正确的吸头入液深度对于微量移液器尤为重要。如果吸头入液过深，则随着压力的加大，吸液量将会增多，保留在吸头表面的液体会影响结果。如果吸头入液太浅，则会造成空气进入，从而产生气泡以及导致容量不准确。正确的入液深度可使准确度提高达 5%。 移液器容量 入液深度 2~20ul 1mm 20 ~ 200ul 2-3mm 100 ~ 1000ul 3-6mm 5000ul ~10ml 6-10mm 注意事项 5 吸头入液时间 在将样品吸入吸头时，在样品中的入液时间是良好移液技法中的关键因素。在平稳松开定位销按钮之后，必须进行短暂暂停，然后再从样品中取出，以确保将全量样品吸入吸头中。如果量较大以及对于粘性物质而言，必须在等候较长时间后再取出，因为移液器中的气室需要一秒钟的时间才能实现均衡。 6