1108-08相关组学3解读.ppt

与肿瘤病因学 致癌因子引起DNA损伤，可引起突变， 如果关键基因功能改变，导致细胞异常 增殖而发生肿瘤。 鉴定隐性癌基因（肿瘤抑制基因）和显性癌基因。 制图策略，鉴定标志物。 肿瘤基因组解剖工程， 基因重排常导致癌基因失活。 / DNA诊断 关键:筛选出特异性的DNA探针 对病原微生物染色体DNA限制性酶切 建立基因文库筛选出特异性DNA探针 通过DNA分子杂交鉴定该种病原微生物 已分离出100多种病原菌的特异性探针 PCR-酶解鉴定 诊断遗传疾病 β珠蛋白基因突变造成的镰刀形细胞贫血病 突变恰好是在CvnI限制性酶切位点 正常CCTGAGG突变成CCTGTGG 在CvnI酶位点两端设计引物PCR扩增后酶切 由于酶切位点突变扩增的产物电泳发生变化 PCR/OLA鉴定 恰好是发生在酶切位点的遗传病是少数 PCR同寡聚核苷酸连接分析结合起来: PCR oligo-nucleotide ligation assay,OLA 用于鉴定其他位点基因突变带来的疾病 原 理 假如150位的T突变成G 根据150位两边的序列合成两段探针 检测两段探针是否能够连接 连接的是正常，没有连接的是突变。 LCR（ligase chain reaction)连接酶链式反应 设计两对引物1、2和1’、2’ 引物与模板完全互补，则相邻引物可以在连接酶的作用下连接起来并可通过PCR扩增。 模板链发生突变引物无法连接也不能扩增。 疾病的分子机制：病原,病理和预后， 疾病的易感性， 遗传与环境的影响。 分子诊断：疾病的预测,药物耐受性， 疾病的分型。 分子治疗：药物靶, 基因治疗 一、常见的人类疾病 广义上人类疾病都属于基因病 人类疾病可分为3大类 单基因病：白化病、血友病、色盲等。 多基因病：高血压、糖尿病、神经病等。 染色体病：染色体畸变所致的遗传病，如先天愚型、猫叫综合征、性腺发育不全症等。 获得性基因病：由病原微生物感染引起。 XhY 34 Y染色体限雄遗传 决定性状的基因位于Y染色体上，患者都是男性。 [例]人类毛耳 人类的染色体畸型 ----21三体先天愚型 第五对常染色体有一短臂缺失所致 猫叫综合症 二、疾病相关基因的鉴定 ▲检测人类基因变异或突变 ▲疾病时基因组差异表达分析 ▲染色体制图定位及疾病相关基因克隆 1. 检测人类基因变异或突变 单链构象多态性(SSCP)、 限制性片段长度多态性(RFLP)， 变性梯度电泳(DGGE)， 单核苷酸多态性（SNPs） 寡核苷酸杂交分析SNP和等位基因特异寡核苷酸杂交 2. 疾病时基因组差异表达分析 某一疾病或综合征基因组与正常 基因组表达差异的比较。 DNA芯片检测的差异表达谱 3.染色体制图定位及疾病相关基因克隆 疾病基因定位： 染色体原位杂交、染色体畸形分析、  连锁分析。 疾病相关基因的克隆： 已掌握疾病相关基因或及其产物的确切信息； 已掌握与疾病可能相关的基因预测资料； 对疾病相关基因毫无所知。 疾病相关基因克隆策略： 功能基因克隆 候选基因克隆 定位基因克隆 定位-候选基因克隆。 通过位置克隆寻找未知生物化学功能的疾病基因 方法： 患病家族 连锁分析 绘制基因的染色体区域图 检查该区域 寻找基因。 很有用 ，障碍艰难 ？？？ 产生遗传标记 跟踪遗传 进行染色体行走 得到覆盖该区域的基因组DNA 直接测序或间接基因识别 分析大约1Mb大小的区域 人类基因组序列草图改变命运 公共数据库 计算机快速识别 候选基因 基因结构信息的帮助 候选基因的突变检测 【例】 孟德尔遗传疾病 [微卫星标识] 搜索一个基因→ → → →几个月可实现 依赖基因组序列直接定位克隆→ → 至少30个疾病基因 基因组序列与染色体删除综合症的机制 同源体重组合 染色体内复制 产生不等交叉 【例】 第22条染色体