2014年高三生物第一轮复习第十八讲DNA是主要的遗传物质解读.ppt

2.同位素标记法 （1）同位素： 12C、 14C 1H 、 3H 32S、 35S 31P 、32P 14N、 15N 16O、 18O ①放射性同位素： ②稳定性同位素： 原子核不稳定，能发出射线，用特定的显影装置可检测到。 原子核稳定，不发出射线。 质子数相同，中子数不同的同一元素 用同位素标记的化合物，化学性质不变，也可以参与生物体内的生化反应。科学家通过特殊的放射性显影仪器追踪放射性同位素标记的化合物，可以弄清楚化学反应过程。科学家也可通过测量分子质量或离心技术来区别稳定性同位素。 （2）同位素标记法类型 放射性同位素标记法 稳定性同位素标记法 12CO2 14CO2 标记32P 标记35S 3.标记T2噬菌体的元素 C、H、O、N、P C、H、O、N、S （1）标记T2噬菌体 ①培养含有32P的DNA的T2噬菌体 Ⅰ、用含有放射性同位素32P培养基培养大肠杆菌 使大肠杆菌细胞内的DNA或DNA的原料含有放射性同位素32P。 Ⅱ、用培养过得大肠杆菌来培养T2噬菌体 4.T2噬菌体侵染大肠杆菌的实验过程 得到DNA含有32P标记噬菌体。 ②培养含有35S的蛋白质的T2噬菌体 Ⅰ、用含有放射性同位素35S培养基培养大肠杆菌 使大肠杆菌细胞内的蛋白质或氨基酸含有放射性同位素35S。 Ⅱ、用培养过得大肠杆菌来培养T2噬菌体 得到蛋白质含有35S标记的噬菌体。 （1）标记T2噬菌体 35S 噬菌体 用含35S的培 养基培养细菌 噬菌体 用含32P的培 养基培养细菌 含32P的细菌 噬菌体 噬菌体 侵 染 含35S的细菌 含35S的细菌 32P 含32P的细菌 侵 染 （2）过程 第一组 第二组 有35S 有32p 极少 35S 极少 32p 实验过程及结果 第二组 实验 第一组 实验 实验结论 子代噬菌体 寄主细胞内 亲代噬菌体 35 S标记 蛋白质 32 P标 记DNA 无35S标记 蛋白质 有32P标 记DNA 外壳蛋白 质无35S DNA有32P 标记 DNA分子具有连续性，是遗传物质 （3）结论 赫尔希和蔡斯的实验表明： 噬菌体侵染细菌时，DNA进入到细菌的细胞中，而蛋白质外壳仍留在外面。因此，子代噬菌体的各种形状，是通过亲代的DNA遗传的。DNA才是真正的遗传物质。 本实验还能间接证明DNA是遗传物质的两个特点：一是DNA前后代保持一定的连续性；二是DNA能够指导蛋白质的合成，从而控制生物的新陈代谢过程和性状。 （4）几个问题 为什么要搅拌？ 为什么要离心？原理是什么？ 从理论上分析，用35S（或32P）噬菌体侵染细菌后，通过搅拌离心，沉淀物（或上清液）应该不含有放射性物质，但是为什么实验结果则出现少量的放射性物质？能否避免此种现象？ 侵染时间过长或过短对实验结果造成的影响相同还是不同吗？请说明理由 搅拌和离心的目的是为了将噬菌体蛋白质外壳同侵入大肠杆菌的噬菌体DNA分开，以便对放射性元素跟踪测试。离心会使质量较轻的噬菌体颗粒进入上清液，而被感染的细菌则形成沉淀，但这必须保证是在菌体裂解之前进行。 噬菌体侵染细菌的速度很快，在37℃的条件下大约40分钟就可以产生100到300个子代噬菌体。从感染到释放前的这段时间叫潜伏期，大约经历20到30分钟。短时间的保温可获得足够数量的子代噬菌体，但又必须避免超出潜伏期（确保溶液分层），所以离心要在“短时间”保温后及时进行。 在T2噬菌体侵染细菌实验中，经过短时间的保温后，用搅拌器搅拌，离心才会使混合溶液分层。其中“短时间”有何意义？ 第一个实验是把35S标记的噬菌体与细菌混合，吸附几分钟后，离心除去没有吸附上的噬菌体，收集沉淀（噬菌体—细菌混合物），将沉淀悬浮后再一次离心，收集上清液和沉淀，分别测定放射性活性，发现80%的放射活性存在于上清液中，沉淀中只有20%的放射活性，这是由于在这期间大部分吸附的噬菌体已经将其DNA注入细菌而蛋白质外壳与细菌解离进入上清液，但仍然有少部分留在细菌细胞壁上，后来证明沉淀中的20%放射活性确实是由于尾丝与细菌表面结合太紧，以至于不容易把它除去。用32P标记的噬菌体和细菌混合，用上述方法同样处理后实验结果差别很大，70%的放射活性在沉淀里，而30%的放射活性在上清液里。在上清液的30%的放射活性可能是由于搅拌细菌时破裂产生的。（几年后发现有些缺损噬菌体粒子不能将其DNA注入到细菌中去）。把这些沉淀悬浮在生长培养基中重新保温，发现能够产生子代噬菌体的细菌同时也具有从亲代噬菌体转移32P到细菌细胞中去的能力。 在赫尔希和蔡斯所做的噬菌体侵染细菌的实验中，在用35S标记的一组侵染实验,主要在上清液中检测到了放射性元素，那么沉淀物的少量放射性是如何产生的?而用32