5多糖分离纯化及含量测定1教程.ppt

多糖的提取方法 1. 溶剂提取法 水提醇沉法、酸提法、碱提法、超临界流体萃取法 2. 酶解提取法 单一酶解法、复合酶解法 3. 强化提取法 超声波辅助提取法、微波辅助提取法、高压脉冲法 1. 溶剂法：水提醇沉法 多糖是极性大分子化合物，提取时应选择水、醇等极性强的溶剂。水提醇沉法是提取多糖最常用的一种方法。 用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提渗漉，然后将提取液浓缩后，在浓缩液中加乙醇，使其最终体积分数达到70 %左右，利用多糖不溶于乙醇的性质，使多糖从提取液中沉淀出来，室温静置一定的时间，多糖的质量分数和得率均较高。 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低，安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也不高。 溶剂法：酸提法 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展了酸提取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下难以溶解； 含有胺基的多糖可使用乙酸或盐酸调节提取液成酸性进行提取，然后再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 影响多糖提取率的因素有：水的用量、pH值、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。 由于H＋的存在抑制了酸性杂质的溶出，稀酸提取法提取得到的多糖产品纯度相对较高； 但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂，且酸会对容器造成腐蚀，除弱酸外，一般不宜采用。 因此酸提法也存在一定的不足之处。 溶剂法：碱提法 有的酸性多糖, 或分子量较大的多糖, 在热水中溶解度不大, 一般在稀碱溶液中溶解度较大, 所以常用稀的NaOH 溶液或Na2CO3 溶液提取。不过用稀碱溶液提取时, 提取温度必须保持在10 ℃以下, 否则多糖容易发生降解反应。 多糖在碱性溶液中稳定，例如粘多糖的提取多采用碱提取法。 多糖碱法提取虽然可提高多糖的收率, 且可缩短提取时间, 但提取液中含有其它杂质如蛋白质, 粘度过大, 过滤困难, 且有些多糖在碱性较强时会水解。 通常先用热水法提取, 然后残渣再用稀碱溶液提取, 这样可将大部分多种类型的多糖提取出来。 溶剂法：超临界流体萃取法 超临界流体是指物质处于临界温度和临界压力以上时的状态，这种流体兼有液体和气体的特点，即密度大，粘稠度小，有极高的溶解，渗透到提取材料的基质中，发挥非常有效的萃取功能。而且这种溶解能力随着压力的升高而增大，提取结束后，再通过减压将其释放出来，具有保持有效成分的活性和无溶剂残留等优点。 超临界流体萃取技术是近年来发展起来的一种新的提取分离技术。由于CO2 的超临界条件（TC＝31.26 ℃，Tp＝7.38 MPa）容易达到，常作为超临界萃取的溶剂，在压力为8～40 MPa 时的超临界CO2 足以溶解任何非极性、中极性化合物，在加入夹带剂后则可溶解极性化物。 由于糖类的化合物分子量较大、羟基多、极性大，用纯二氧化碳提取产率较低，加入夹带剂或加大压力则可提高提取率。该法的缺点是设备复杂，运行成本高，提取范围有限。 2. 酶解法：单一酶解法 单一酶解法是指使用一种酶来提取多糖，从而提高提取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维素酶等。 蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利于多糖的浸出。 纤维素酶则能特异性地降解纤维素，使植物细胞的细胞壁破裂，有利于多糖易从胞内释放。 影响因素：酶种类和添加量、酶解温度(℃)、酶解pH 值、水解时间、料液比有直接关系。 酶解法：复合酶解法 复合酶解法采用一定比例的果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶，主要利用纤维素酶和果胶酶水解纤维素和果胶，使植物组织细胞的细胞壁破裂，释放细胞壁内的活性多糖，多糖释放的多少和复合酶的加入量、酶解温度、酶解时间、酶解pH 值及料液比有直接的关系。 酶解法提取的实质是通过酶解反应强化传质过程。该法具有条件温和、杂质易除和得率高等优点。 3. 物理强化法：超声波辅助提取法 超声波是频率高于20kHz的声波，它方向性好，穿透能力强，易于获得较集中的声能。 超声波提取是利用超声波的机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质的运动速度及穿透力，能有效的破碎生物细胞和组织，从而使提取的有效成分溶解于溶剂之中； 空化作用, 形成高温和高压的环境, 增加物质分子运动的频率和速度、溶剂的穿透力, 从而加速目标成分进入溶剂, 提高提取率。 热效应增大了有效成分的溶解速度，这种热效应是瞬间的