分子生物学四课件.pptVIP

第四章 分子生物学的研究方法 一、重组DNA技术 理论上三大发现 技术上三大发明 * 遗传物质是DNA DNA双螺旋结构 遗传信息传递方式 工具酶 载体 转录酶 1973年 以DNA重组实验成功为标志 现代分子生物学 跨越天然物种屏障 定向创造新物种 工具酶 基因 载体 受体细胞 必要条件 操作过程 获得外源基因（目的基因/目的片段） 与载体进行体外重组形成重组体（重组子） 将重组体导入（转化/转导/转染）受体细胞 细胞扩增和筛选含有重组体的受体细胞（宿主细胞/寄主细胞） 培养含有重组体的细胞（阳性克隆）检测表达产物 分、 切、 接、 转、 筛 + 检 工具酶 限制性内切酶 连接酶 修饰酶 DNA聚合酶 DNA Polymerase 逆转录酶 Reverse Transcriptase T4多核苷酸酶 T4 Polymerase Kinase 碱性磷酸酶 Alkalinephosphatase 活性定义 限制酶的一个活性单位（1U），原则上是在50μl的反应液中，37℃的温度条件下，经过1小时反应，将1μgDNA完全分解所需要的酶量。 特点 ① 识别部位序列一般为4、5或6个核苷酸序列； ② 呈双重轴对称。 限制性内切酶 性质 切断识别部位或其附近特定部位后，产生两种末端，即平齐末端和粘性末端（5’突出端和3’突出端）。 Pst I CTGC