分光光度法(新)：教案分析.pptVIP

第九章 吸光光度法 学时数：6学时 第九章 吸光光度法(Spectrometer) 前 言 基于物质对光的选择性吸收而建立的分析方法称为吸光光度法。 包括比色法、可见分光光度法及紫外分光光度法等。 比色法(Colorimetey)：比较颜色深浅来测定物质浓度的方法。 分光光度法(Spectrophtometer)：应用分光光度计来进行比色分析的方法。（又称吸光光度法） 分光光度法特点： 1 灵敏度高：达10-5～10 -6 mol/L。适用于微量组分的测定。 2 准确度高：相对误差为2 ～5%，满足微量组分测定的要求 。 3 速度快、仪器操作简单、价格便宜。 4 应用广泛: ①分析对象有无机物质和许多有机物质的微量成分。 ②用于化学平衡等理论的研究。 物质对光吸收的本质 9.1.3 光的吸收基本定律—朗伯-比尔定律 紫外可见分光光度计 光度计的基本部件和光学示意图 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 图6 72型分光光度计光学系统图 1-光源 2-进光狭缝 3-反光镜 4,7-透镜 5-棱镜 8-出光狭逢 9-比色皿 10-光量调节器 11-硒光电池 12-检流器 各部件的作用及主要性能 1光源 可见光区：使用钨灯，加热到白炽时发出波长约为320～2500nm的连续光谱。光强度与温度成正比，一般工作温度为2600～2870K(熔点3680K)。温度与电源电压有关，电压稳定，光强度稳定。 近紫外光区：使用氢灯或氘灯，产生180～375nm连续光谱。 将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置。 由棱镜或光栅等单色元件及狭缝和透镜组成。 2 单色器 棱镜 棱镜单器由棱镜、透镜和狭缝组成。单色的纯度决定于棱镜的色散率和出射狭缝的宽度。 玻璃棱镜对400～1000nm波长的光色散较大，适用于可见光分光光度计。 光栅 光栅是利用光的衍射和干涉原理而进行分光作用。 具有色散均匀、工作波长范围宽、分辨率高等特点，一般用于中高档仪器中。 滤光片 三棱镜分光 各部件的作用及主要性能 3 吸 收 池 有玻璃和石英两种。 可见光区：用无色透明、耐腐蚀的玻璃比色皿； 紫外光区：用石英比色皿。其厚度分别为 0.5、1、2、3 cm的长方形或园柱形。 4 检测 系统 测吸光度时，透过比色池的光强度先转为电流，这种光电转换器件称为检测器。要求检测器对测定波长范围的光有快速、灵敏的响应。且产生的光电流与光强度应成正比。 光电比色计及可见光分光光度计常使用硒光电池或光电管作检测器，采用检流计作读数装置，两者组成检测系统。 1 2 3 e- e- + — e- 4 图7 硒光电池示意图 1-Fe片 2-半导体硒 3- 金属薄膜 4-入射光线 常用硒光电池，如图7。 一般可产生10-100μA光 电流。电流大小与照射光 强度成正比。长时间强光 照射时，会产生“疲劳”。具有坚固、价廉和无需外接电源等优点。 光电池 由一个阳极和一个光敏阴极组成的真空二极管。阴极表面镀有碱金属或碱金属氧化物等光敏材料，有足够能量光子照射时，能发射电子。当两极间有电位差时，有电流。其大小与光照强度有关.为光电池的1/4. 光电管 光电二极 管阵列 三、分光光度计的类型 单色器 参比池R 样品池S 检测器 光源 1 单光束 单色器 R S 检测器 λ λ 光源 2 双光束 I0 It 单色器 单 色 器 样品池 检测器 λ1 λ2 光源 λ1 λ2 3 双波长 9.3 显色反应及显色条件的选择 9.3.1 显色反应的选择 待测组分转变为有色化合物的反应叫显色反应。与待测组分反应形成有色化合物的试剂叫显色剂。 显色反应可分为两大类：络合和氧化还原反应。前者是主要的。 1. 灵敏度高 一般κ为104～105时，可认为反应较灵敏。 2. 选择性好 显色剂仅与一个组分或少数几个组分反应显色。 3. 显色剂在测定波长处无明显吸收 通常把两种有色物质最大吸收波长之差称为“对比度”，一般要求显色剂与有色化合物的对比度Δλ在60nm以上。 显色剂应具备条件: 4. 反应生成的有色化合组成恒定，化学性质稳定 1 显色剂用量 图8 吸光度与显色剂浓度的关系 Mo(V)与SCN-反应情况就如图8(3)。 9.3.2 显色条件的选择 M + R → MR （待测组分） （显色剂） （有色络合物） 2 酸 度