微生物工程(发酵)第三章培养基制备与灭菌教案分析.pptVIP

薯类原料：红薯、木薯； 谷物原料：玉米 野生植物原料：橡果、葛根、蕨根 辅助原料：麸皮、米糠 加工：糊化、液化 淀粉→糊精、低聚糖 糖化 产生葡萄糖 淀粉颗粒受热并吸水膨胀，体积迅速增大，固态结构被破坏，形成粘稠的液体，称为糊化； 糊化的淀粉在酶的作用下，分子链被切断，相对分子量变小，粘度迅速降低的过程称为液化； 经液化后的料液中加入一定量的糖化酶（葡萄糖淀粉酶），使糊精或低聚糖水解为葡萄糖，称之为糖化。 纤维素原料的预处理及加工： 预处理： 用化学、物理、生物学的方法，去除半纤维素和木质素，破坏纤维素的结构； 加工： 酸水解 酶水解 3.2 发酵培养基的设计和优化 目前还不能完全从生化反应的基本原理来推断和计算出适合某一菌种的培养基配方，只能用生物化学、细胞生物学、微生物学等的基本理论，参照前人所使用的较适合某一类菌种的经验配方，再结合所用菌种和产品的特性，采用摇瓶、玻璃罐等小型发酵设备，按照一定的实验设计和实验方法选择出较为适合的培养基 3.2.1发酵培养基设计的基本原则 根据生产菌株的营养特征配置培养基； 营养成分的配比适当； 渗透压适宜 pH值适当 各成分的加入次序及步骤适当； 3.2.3 发酵培养基设计和优化步骤 ③ 各成分最适的浓度（正交实验设计） ① 根据前人的经验和培养基成分初步确定可能的培养基成分； ② 通过单因子实验最终确定出最为适宜的培养基成分； 类胡萝卜素高产菌Y11的培养基的优化 郭秒,食品与工业发酵，2004 类胡萝卜素的作用：色素、营养保健 原培养基: 初步确定可能的培养基成分(以碳源为例) 通过单因子实验确定适宜的培养基成分(以碳源为例) 考虑到成本：乙酸钠是较为合适的碳源 进一步：乙酸钠的浓度2%比较好 结果： 碳源：乙酸钠 0. 2% 氮源：氯化铵 0.2% 酵母膏0.03% 无机盐: 复合无机盐0.05% 正交设计确定优化的配方 改进后培养基的发酵结果 例： 青霉素发酵 发酵摇瓶：玉米浆4%，乳糖10%，(NH4)SO4 0.8% 轻质碳酸钙1% 发酵罐:葡萄糖流加控制总量10-15%，玉米浆总量4-8% 补加硫酸、前体等 摇瓶发酵培养基和罐的基础培养差别很大 摇瓶优化配方：菌种筛选，反应器研究的基础 3.3 培养基及设备的灭菌 3.3.1常见灭菌方法： 加热灭菌 过滤灭菌 辐射灭菌 化学灭菌 熏蒸灭菌 1）干热灭菌 烘箱内热空气灭菌 火焰灼烧 干热灭菌 160℃，2小时 1、高温灭菌 2）湿热灭菌 1）巴斯德消毒 2）煮沸消毒 3）丁达尔灭菌 4）常规高压灭菌 121℃，15分钟； 115℃，30分钟； 135-150℃，5-15秒，工业上发酵培养基 135-150℃，2-6秒，牛奶或其它液态食品 过滤除菌 对不耐热液体培养基和空气灭菌进行过滤除菌； 硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜 （0.22 0.45μm） 核孔滤器（聚碳酸胶片）  紫外灭菌 紫外线：诱导核酸形成胸腺嘧啶二聚体，从而干扰了核酸的复制； X射线和γ射线能使其它物质氧化或产生自由基破坏和改变生物大分子的结构，以抑制或杀死微生物。 化学药品灭菌： 杀菌剂、消毒剂、防腐剂； 高锰酸钾 漂白粉 乙醇 熏蒸灭菌 甲醛 6g/m3 硫磺：2-3g/m3 3.3.2 发酵工程培养基灭菌 实罐灭菌（实消）（分批灭菌） 优点：设备简单、投资少、灭菌效果可靠。 不足：耗时长、罐利用率低、培养基营养成分破坏较多。 操作流程： 连续灭菌（连消） 优点：设备体积小、杀菌所需时间短、对营养物质的破坏少； 不足：设备复杂，投资较大。 套管式加热器 又称塔式加热器； 由多孔的蒸汽导管和外套管组成； 一般塔有效高度2－3m，料停留时间20－30s； 设备高大，噪声大； 喷射式加热器 目前的常用装置； 预热的料由泵从进料口打入，流速约1.2m/s，饱和蒸汽由物料管外的环隙打入，流速约20－25m/s,二者瞬间混匀并达到灭菌温度，挡流板加大其混匀效果。 结构简单、占地面积小，噪音小，运行稳定； 需注意物料管与喷嘴口的同心问题； 杂菌的残留概率＜1%即可 第三章 培养基的制备与灭菌 3学时 思考题： 培养基有哪些化学成分组成？这些成分的来源有哪些（尤其是C、N源）？各成分的作用是什么？ 前体物质、抑制剂、促进剂的概念 发酵工业原料的选择原则有哪些 发酵培养基设计的基本原则有哪些 发酵培养基设计和优化步骤 常用的灭菌方法有哪些？ 发酵工程培养基灭菌的主要灭菌方法及其各自的优缺点； 按纯度 合成培养基 : 原料其化学成分明确、稳定 适合于研究菌